【作者】 陈涵；

【导师】 王宗华； 鲁国东；

【作者基本信息】 福建农林大学 ， 生物化学与分子生物学， 2006， 硕士

【摘要】 葫芦科作物有多种种传病毒，植物检疫部门如何同时快速检测这些病毒的问题有待解决。番木瓜环斑病毒(Papaya Ringspot Virus，PRSV)是葫芦科作物的种传病毒之一，本研究开展了葫芦科作物种子上的PRSV的分子检测研究，可以为解决上述问题提供借鉴。 以海口、扶绥、郑州、漳州等地采集回来的叶片样品为材料，首先通过双抗体夹心酶联免疫吸附分析(DAS-ELISA)的方法对所采集的叶片样品进行检测。在获得初步结果的基础上利用RT-PCR的方法进行检测。在确认叶片所携带的病毒为PRSV后，利用梯度PCR的方法及调整Taq DNA聚合酶浓度的方法确认退火温度为56℃的条件下使用2U的Taq酶可获得最佳RT-PCR检测结果。在优化后的PCR条件下，以西葫芦种子为样品，采取液氮研磨及TRIzol的方法提取PRSV的总RNA并进行检测，同时播种获得叶片后用DAS-ELISA的方法进行验证。最终建立一套可以直接从种子中检测PRSV的RT-PCR检测方法，为检疫部门提供了可以参考的快速检测番木瓜环斑病毒的分子方法。 已有的方法主要针对发病叶片的检测，本研究建立了基于种子的葫芦科作物PRSV的分子检测方法，很有实用前景。更多还原

【Abstract】 Papaya ringspot virus ( PRSV ) is an important seed-bome virus infecting cucurbitaceous crops but the standard detection of PRSV is absent. It’s necessary to set up detection progresses of PRSV.In this study, DAS-ELISA (Double Antibody Sandwich ELISA) was used to detect PRSV in the leafages of the samples, which were collected in Haikou city, Fusui city, Zhengzhou city, Zhangzhou city. The gene was amplified by PCR with the cDNA reverse-transcript from the RNA of the leafages. The most suitable conditions with 56 °C and 2 U Tag DNA Polymerase were obtained by grad-PCR. Then DAS-ELISA and RT-PCR were employed to detect the PRSV in the seeds of pumpkin and the leafages collected from the plants.The results will provide rapid detection program of PVSV with RT-PCR.更多还原