【作者】 申严杰；

【导师】 谢建平； 霍克克； 胡昌华；

【作者基本信息】 西南大学 ， 生物化学与分子生物学， 2006， 硕士

【摘要】 结核病至今仍威胁着人类的健康。结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)可以在寄主体内进入休眠状态，复苏促进因子(resuscitation-promoting factor,Rpf)可激活休眠的结核菌。微生物体内的乙醛酸循环对微生物度过营养贫乏阶段具重要作用，该循环的异柠檬酸裂解酶(Isocitrate lyase,ICL)对某些如白色假丝酵母(Candida albicans,C. albican)等真菌和沙门氏菌、结核分枝杆菌等细菌的毒力和持续感染是必须的。用酵母双杂交筛选结核分枝杆菌ICL和其他蛋白质之间的相互作用，有助于进一步理解并研究结核分枝杆菌的致病机理。 本论文的目的是采用酵母双杂交技术从人肝脏cDNA库中筛选与ICL相互作用的蛋白。将克隆的结核分枝杆菌icl构建到BD载体，自激活检测通过后，和AD库共转酵母细胞，LacZ检测后，抽提酵母质粒，转化大肠杆菌，所抽质粒分别同BD空载和重组BD共转酵母细胞，通过X-Gal检测后测序并在数据库中比对鉴定。结果所筛阳性克隆为145个，4个通过验证，其中3个均为补体成分C3的C末端片段。C3作为补体系统的关键组分，为该系统的3条途径所共有。对ICL和C3的相互作用的研究将有助于理解并揭示结核分枝杆菌与免疫系统的关系，为新的抗结核药物的开发提供新的思路。 为了解C3的其他相互作用蛋白，将所得C3构建到BD载体后继续用上述相同的酵母双杂交技术筛选。结果只有一个阳性克隆，且该克隆通过验证后鉴定为zyxin。在人类组织中广泛表达的zyxin，介导细胞的生长和迁移，调节细胞骨架的组装等。C3和zyxin相互作用的进一步研究将对细胞活动有更深入的了解。更多还原

【Abstract】 Mycobacterium tuberculosis (MTB) is the causative bacterium of tuberculosis. With the increase of drug-resistant Mycobacterium tuberculosis , Effective therapy ways hadn’t explored. MTB can be dormancy in the host cell, at the same time it can be activated by resuscitation-promoting factor (Rpf). The glyoxylate cycle/shunt of microorganism is very important for survivance in the lack of nutrition. Isocitrate lyase (ICL) is one of the important enzymes of the cycle, and it is required for C.albicans 、 Salmonella and MTB persistence and virulence. The interaction of ICL with other proteins could further help us understand the relation of MTB and host cell.In this article, yeast two-hybrid technology was used to identify the interaction partner of ICL from human liver cDNA. The protocol was to clone icl. assay of X-Gal, co-transform with cDNA to Mav203, assay of X-Gal, extract yeast plasmid, transform E. coli, co-transform plamid更多还原