抗体单分子膜的制备及传感性能的研究

【作者】 孙越；

【导师】 冯春梁；

【作者基本信息】 辽宁师范大学 ， 物理化学， 2005， 硕士

【摘要】 利用自组装单分子膜（SAMs）技术,以碳二亚胺和戊二醛为偶联剂和交联剂在金等基础电极上固定羊抗小鼠IgG 抗体,制备电位型无标记免疫传感器。主要进行了如下几方面的研究: 1 基础电极的选择首先分别测定了真空蒸镀的金片电极、金圆盘电极、银圆盘电极的电位随时间变化曲线,结果证明电位信号比较稳定,这些电极可作为电位型免疫传感器的基础电极。然后在上述电极表面通过自组装单分子膜技术固定抗体,制备免疫传感器,从传感器的检测下限、检测范围、工作曲线的斜率等角度对传感器进行评价比较,真空蒸镀的金片电极实验结果最好,所以选择真空蒸镀的金片电极作为本实验的基础电极。2 自组装单分子膜体系的选择将SH（CH₂）₁₀COOH和EG₆OCH₂COOH以及半胱氨酸分别组装在真空蒸镀的金片电极表面,制成单分子膜电极,测定它们在醋酸盐缓冲溶液中的平衡电位,与裸金电极相比,平衡电位变化很大,说明三种巯基化合物在金片电极表面上形成了自组膜。通过碳二亚胺偶联剂在三种自组膜上固定抗体制备免疫传感器,发现巯基十一酸自组膜免疫传感器的灵敏度较好,检测范围最宽。所以选择巯基十一酸作为碳二亚胺法制备免疫传感器的自组膜体系。又分别使用碳二亚胺偶联法和戊二醛交联法在半胱氨酸自组膜上固定抗体制备免疫传感器。对比发现,使用戊二醛交联法时,传感器的检测范围较宽。所以对于半胱氨酸自组膜体系使用戊二醛交联法固定抗体的效果较好。　3 抗体（抗原）分子的最佳固定化条件通过查阅文献及实验室前期工作确定抗体的固定化条件为30℃,pH=5.5。更多还原

【Abstract】 In　this　paper,　a　method-immobilized　antibody　modified　with　self-assembled　monolayer　（SAM）　has　been　described　by　means　of　covalent　binding　with　1-ethyl-3-[3-（dimethylamino）propyl]　carbodiimide　hydrochloride　（EDC）　or　glutaraldehyde.　The　preparation　of　the　immunosensor　is　described　as　followed:　1.The　electrochemical　behavior　of　gold　planar　electrode　、silver　disk　electrode、　gold　disk　electrode　has　been　investigated.　They　were　used　to　fabricate　the　immunosensor,　respectively.　It　shows　that　the　immunosensor　using　gold　planar　is　more　sensitive　and　more　stable.　2.　The　electrochemical　behavior　of　three　different　SAM　[SH（CH2）10COOH　、EG6OCH2COOH　and　cysteine　]electrodes　has　been　investigated.It　shows　these　three　thiol　were　successfully　immobilized　on　the　gold　planar　because　the　potential　change　great.Different　thiol　were　used　to　fabricate　the　immunosensor,　It　shows　that　the　immunosensor　using　SH（CH₂）₁₀COOH　has　a　larger　detection　range　and　a　better　linear　relationship.　　3.　The　suitable　temperature　and　pH　to　prepare　of　the　immunosensor　recorded　in　literature　is　30℃　and　pH=5.5.　　4.The　response　of　the　immunosensor　to　mouse　IgG　at　different　temperature　and　pH　has　been　determined.　It　shows　the　suitable　temperature　and　pH　for　immunoreactions　is　30℃and　pH=5.5.　5.The　characteristics　of　the　immunosensor　using　SH（CH₂）₁₀COOH　have　been　investigated　in　detail.　It　can　detect　the　target　molecule　in　the　range　of　0.4-12ng/mL.　The　detection　limit　to　mIgG　is　0.4ng/mL,　the　correlation　coefficient　is　0.9912,the　response　time　is　12　min,　the　immunosensor　can　be　regenerated　using　0.04mol.L-1HCl　and　its　lifetime　is　16　days.　6.The　characteristics　of　the　immunosensor　using　cysteine　have　been　investigated　in　detail.　It　can　detect　the　target　molecule　in　the　range　of　0.05-5ng/mL,　The　detection　limit　to　mIgG　is　0.05ng/mL,　the　correlation　coefficient　is　0.9931,the　response　time　is　14　min,　the　immunosensor　can　be　regenerated　using　glycin-HCl　buffer　（pH2.3）.更多还原