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翼螺旋转录因子FOXO1的DNA结合域的表达、纯化及结合特性

Expression and purification of FOXO1 DNA binding domain and its DNA properties

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【作者】 哈依努尔； 李俊； 陈永恒； 陈林； 陈主初；

【Author】 HA Yinuer;LI Jun;CHEN Yongheng;CHEN Lin;CHEN Zhuchu;Key Laboratory of Cancer Proteomics of Chinese Ministry of Health, Xiangya Hospital, Central South University;Department of Respiratory, First Affiliated Hospital, Xinjiang Medical University;Department of Chemistry and Biological Sciences, University of Southern California;

【机构】 中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室； 新疆医科大学第一附属医院呼吸科； 南加州大学化学与生命科学系；

【摘要】 目的:探讨翼螺旋转录因子FOXO1的DNA结合域(FOXO1 DNA binding domain,FOXO1-DBD)的表达、纯化及与DNA的结合特性。方法:采用优化FOXO1-DNA的基因序列和低温诱导的方式实现FOXO1-DBD蛋白的可溶性表达,通过镍亲和层析及阳离子交换层析进行纯化,并经凝胶迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证FOXO1-DBD的DNA结合特性。结果:优化后的FOXO1基因在21℃时编码的蛋白大多以可溶性方式表达,通过两步纯化即可获得95%以上纯度的FOXO1-DBD蛋白,纯化的蛋白与含FOX家族DNA结合基序(G/ATAAACA)的DNA序列显示良好的结合特性。结论:建立了FOXO1-DBD蛋白高效表达、纯化的方法,验证了FOXO1蛋白在识别DNA上的复杂性。

【Abstract】 Objective: To express and purify FOXO1 DNA binding domain(DBD) and to evaluate its DNA binding properties.

【关键词】 FOXO1； DNA结合域； 表达纯化； 凝胶迁移实验；
【Key words】 FOXO1； DNA binding domain； expression and purification； electrophoretic mobility shift assay；
【基金】 国家自然科学基金(81372904)~~
  • 【文献出处】 中南大学学报(医学版) ,Journal of Central South University(Medical Science) , 编辑部邮箱 ,2017年01期
  • 【分类号】R346
  • 【被引频次】5
  • 【下载频次】137
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