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肠道病毒71型VP1蛋白在昆虫杆状病毒表达系统的表达

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【作者】 赵培培； 孔枕枕； 刘海冰； 茅凌翔； 苏兆亮； 仝佳； 王胜军； 陈建国；

【机构】 江苏大学检验医学研究所； 江苏大学附属人民医院检验科； 镇江市疾病预防控制中心检验科；

【摘要】 目的利用昆虫杆状病毒表达系统表达肠道病毒71型VP1蛋白并对其进行纯化。方法首先通过化学合成法合成EV71 VP1基因,然后将EV71 VP1基因插入到供体质粒pFast Bac1中,构成重组质粒pFast Bac1-VP1,再转入JM190感受态细菌扩增,然后提取重组质粒pFast Bac1-VP1转入DH10BacTM感受态细胞,通过转座从而获得重组质粒bacmid-VP1,采用脂质体Cellfectin Reagent将重组质粒bacmid-VP1转染Sf9细胞。通过SDS-PAGE、Western blot法检测目的蛋白的水平,经镍离子亲和层析,纯化VP1蛋白。结果 SDS-PAGE及Western blot法检测获得蛋白的相对分子质量与预期结果一致。Bradford分析纯化后蛋白的浓度为70μg/m L,纯化度达90%。结论利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达EV71 VP1蛋白。

【关键词】 EV71； VP1蛋白； 昆虫-杆状病毒表达系统；
【基金】 国家自然科学基金(81101227);镇江市社会发展项目(SH2012036)
  • 【文献出处】 细胞与分子免疫学杂志 ,Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology , 编辑部邮箱 ,2015年09期
  • 【分类号】R392
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】131
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