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豌豆ISSR-PCR反应体系的建立和优化

Establishment and Optimization of ISSR Reaction System for Pea

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【作者】 曾亮； 李敏权； 杨晓明； 赵丽娟； 杨发荣；

【Author】 ZENG Liang1,LI Min-quan1,2,YANG Xiao-ming2,ZHAO Li-juan2,YANG Fa-rong2(1.College of Grassland Science,Gansu Agricultural University,Lanzhou,Gansu Province 730070,China; 2.Academy of Gansu Agriculture Science,Lanzhou,Gansu Province 730070,China)

【机构】 甘肃农业大学草业学院； 甘肃省农业科学院；

【摘要】 以豌豆(Pisum sativum L.)DNA为材料,对影响其ISSR-PCR反应体系中的5种主要因素(模板DNA量、引物浓度、dNTPs浓度、Taq酶量、退火温度)进行优化,最终确定了豌豆ISSR-PCR反应的最佳体系(20μL)为:15ng模板DNA,0.15mmol.L-1dNTP,0.5μmol.L-1ISSR引物,1UTaq DNA聚合酶,引物842号的最适退火温度为50℃。该体系的建立为今后利用ISSR技术进行豌豆属种质资源的遗传多样性分析、遗传图谱构建和基因定位奠定了技术基础。

【Abstract】 The optimum ISSR-PCR system for peas is established using ISSR-PCR amplification with five factors(DNA template,primer,dNTPs,Taq DNA polymerase and annealing temperature).The optimum reaction system(20 μL) contains 15 ng DNA template,0.15 mmol·L-1 dNTP,0.5 μmol·L-1 ISSR primer,1U Taq DNA polymerase.The suitable annealing temperature of primer 842 is 50℃.This reaction system will provide a technological base for genetic diversity analysis of pea germplasm,genetic map construction and gene location.

【关键词】 豌豆； ISSR； PCR反应体系； 优化；
【Key words】 Pisum sativum L.； ISSR； PCR reaction system； Optimization；
【基金】 现代农业食用豆产业技术体系专项(CARS-09);国家自然科学基金(31160304)资助
  • 【文献出处】 草地学报 ,Acta Agrestia Sinica , 编辑部邮箱 ,2012年03期
  • 【分类号】S643.3
  • 【被引频次】5
  • 【下载频次】113
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