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M-CSF核内稳定表达细胞系的构建和鉴定

Construction of nuclear localization vector pCMV/M-CSF and establishment of its stably expressing cell line

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【作者】 涂剑； 滕淑静； 张晓红； 赵雪琴； 唐圣松；

【Author】 TU Jian, TENG Shu-jing, ZHANG Xiao-hong, ZHAO Xue-qin, TANG Sheng-song

【机构】 南华大学药物药理研究所； 岳阳职业技术学院； 南华大学组织胚胎学教研室；

【摘要】 目的:构建真核细胞pCMV/nuc/M-CSF载体,建立M-CSF核内稳定表达细胞系,为进一步研究M-CSF的核内作用奠定基础。方法:采用PCR扩增人M-CSF活性片段,将M-CSF片段插入真核表达载体pCMV/myc/nuc,强制性把M-CSF引入细胞核内,通过PCR、测序鉴定筛选阳性重组体pCMV/M-CSF,脂质体介导转染HeLa细胞,经G418筛选后,用RT-PCR、间接免疫荧光鉴定其在HeLa细胞中的表达及定位分布。结果:琼脂糖电泳结果显示插入片段为1400bp左右,与预期M-CSF分子大小相当;DNA测序分析表明插入质粒的M-CSF无读码框移位,并与来源序列一致。RT-PCR和间接免疫荧光检测表明,转染pCMV/M-CSF的HeLa细胞能稳定表达M-CSFmRNA与M-CSF蛋白,且表达的M-CSF定位于HeLa细胞的细胞核。结论:成功构建了真核细胞pCMV/nuc/M-CSF载体,建立了M-CSF核内稳定表达细胞系。

【关键词】 巨噬细胞集落刺激因子； pCMV/myc/nuc载体； HeLa细胞；
【Key words】 Macrophage colony-stimulating factor； pCMV/myc/nuc vector； HeLa cells；
【基金】 国家自然科学基金资助项目(No.30270684);湖南省学科建设资助项目
  • 【文献出处】 中国病理生理杂志 ,Chinese Journal of Pathophysiology , 编辑部邮箱 ,2009年03期
  • 【分类号】R392
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】144
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