CCR5Delta32基因在人PBMC的表达及其对CCR5/CXCR4分子的影响

【摘要】 目的:在人外周血单个核细胞(PBMC)内表达CCR5Delta32蛋白,研究该蛋白与CCR5和CXCR4分子间是否存在相互作用。方法:构建pLenti-CCR5Delta32慢病毒载体,包装后产生重组慢病毒。将其转染PBMC,荧光显微镜观察转染情况,Western blot鉴定目的蛋白表达,免疫共沉淀检测目的蛋白与CCR5和CXCR4分子间的相互作用。结果:成功构建了pLenti-CCR5Delta32慢病毒载体,经包装后产生重组慢病毒,滴度约为5×108TU/L。将其转染PBMC,观察到约半数PBMC胞质内有绿色荧光蛋白表达,经Western blot鉴定有目的蛋白表达。免疫共沉淀结果显示,CCR5Delta32与CCR5、CCR5Delta32与CXCR4以异源二聚体形式结合,之间确实存在着相互作用。结论:成功地构建重组慢病毒载体并将其转染PBMC靶细胞,观察到目的蛋白与HIV-1两类辅受体(CCR5和CXCR4)间确实存在相互作用。这些工作为后续的AIDS基因治疗研究奠定了基础。更多还原