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可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)及其突变体的表达纯化及生物活性观察

Expression,purification and bioactivity observation of cocaine and amphetamine regulated transcript and its mutants

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【作者】 周京晶； 路长林； 由振东；

【机构】 第二军医大学基础部神经生物学教研室；

【摘要】 目的:表达纯化可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)及其突变体,观察其对大鼠进食行为的影响。方法:PCR扩增CART活性片段CART55-102cDNA,构建表达CART55-102原核表达载体,并对其68位和94位半胱氨酸残基突变,构建表达CART55-102(Cys68Ser)和CART55-102(Cys94Ser)原核表达菌株,经IPTG诱导表达后,亲和层析纯化3种小肽;行为学技术检测原核表达小肽对大鼠进食行为的影响。结果:获得的重组CART55-102及其突变体的纯度在95%以上,产物得率约75%;CART55-102可显著抑制饥饿大鼠的进食行为,而68和94位突变体对饥饿大鼠的进食行为无明显影响。结论:原核表达系统可以成功制备高纯度CART活性小肽和突变体,68位和94位突变导致CART抑制进食的作用消失。

【关键词】 可卡因-苯丙胺调节转录肽； 突变体； 基因表达； 纯化； 二硫键；
【基金】 国家自然科学基金(30271258,3067244);国家重点基础研究项目(“973”计划,2003CB515407);上海市重点基金(06JC14008)~~
  • 【文献出处】 第二军医大学学报 ,Academic Journal of Second Military Medical University , 编辑部邮箱 ,2009年03期
  • 【分类号】Q78
  • 【下载频次】108
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