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一步法扩增克隆IBDV上海超强毒VP2-4-3基因

Amplification and Clone of VP2-4-3 Gene of Very Virulent Infectious Bursal disease virus

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【作者】 孙建和蒋静陆苹赵渝

【Author】 SUN Jian he,JIANG Jing, LU Ping\+\{\},ZHAO Yu (The Institute of Bio Technology, School of Agriculture, Shanghai JiaoTong University,Shanghai, 201101,China)

【机构】 上海交通大学农业与生物学院生物技术研究所上海交通大学农业与生物学院生物技术研究所 上海201101上海201101上海201101

【摘要】 分离、纯化了鸡传染性法氏囊病病毒超强毒 (vvIBDV)上海株SH95的病毒核酸dsRNA ,应用随机引物将RNA反转录成cDNA ,以此为模板一步扩增出A片段前体融合蛋白基因即VP2 4 3基因 ,将其克隆入 pGEM T载体 ,并进行序列分析 ,其与超强毒株HK4 6的核苷酸序列的同源性达 98% ,整个基因有 5个氨基酸差异 ,同源性达99.5 1% (10 0 7/ 10 12 )。

【Abstract】 The methods of reverse transcription, polymerase chain reaction (PCR) amplification, and cloning of full length VP2 4 3 gene of a very virulent infectious \%Bursal disease virus\%(vvIBDV) strain SH95 were developed. The use of random primer and a reverse transcriptase lacking RNase H activity produced full length coding region and non coding region cDNA copies of the viral genomic segments. The 3060 base pairs (bp) of VP2 4 3 were amplified by long and accurate PCR in a single step, successfully cloned and sequenced revealing their identity of IBDV.

【基金】 上海市科学技术发展基金资助项目 (0 1JC14 0 3 4)
  • 【文献出处】 中国病毒学 ,Virologica Sinica , 编辑部邮箱 ,2002年04期
  • 【分类号】S852.65
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】55
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