一种感受态细菌的制备方法

【摘要】 <正> 目前,尽管分子克隆实验中通常采用的感受态细菌的制备方法可满足一般的实验要求,但对于获得比较困难的DNA分子而言,最大限度地提高质粒转化细菌菌株的效率,对提高实验成功率无疑具有重要意义[1]。我们通过摸索,建立起一种方便、快捷、重复性好,转化效率高的感受态细菌的制备方法,介绍如下。1 材料与方法1.1 缓冲液的配制 配制100ml(pH6.2)缓冲液,各组分终浓度分别为:KCl 100mmol,CaCl2 50mmol,Glucose 10％,KAc 10mmol。0.22μm滤器滤过除菌,4℃保存,3个月有效。1.2 实验步骤 取单克隆细菌DH—5α接种于含有1ml LB培养基的试管中,37℃温育,振摇过夜;将上述菌液1ml加至100ml LB培养基中,37℃摇床(250r/min)振荡培养3h至OD≈0.5;菌液离心,4℃,4000r/min,离心10min,弃去上清液;更多还原