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水稻全生育期均一化cDNA文库的构建和鉴定

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【作者】 储昭晖； 彭开蔓； 张利达； 周斌； 魏君； 王石平；

【机构】 华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室； 国家农作物分子技术育种中心； 国家农作物分子技术育种中心 国家农作物分子技术育种中心； 武汉430070.； 武汉430070.；

【摘要】 以优良杂交水稻的恢复系明恢63为材料,构建覆盖水稻基因组的cDNA文库,用于功能基因组的研究.选择水稻全生育期过程中的9个时期的不同组织和病原诱导的组织分别构建了15个定向cDNA文库.依据基因组DNA饱和杂交的原理,将从15个独立的cDNA文库中提取的质粒混合,并与固定在磁珠上具有互补性的2份基因组DNA亲和体系饱和杂交,收集杂交组分中的质粒并重新转化大肠杆菌,获得全生育期均一化cDNA文库.该文库平均插入片段1.4 kb,含62000个克隆子.反向Northern杂交显示,该文库收集了众多表达丰度极低的基因以及特异表达的基因.对文库中随机的10750个克隆进行了测序,序列分析比较后获得6399条非重复的EST(expressed sequence tag)序列,非重复序列占59.5％,.目前,用该文库制作的cDNA芯片已被用于功能基因组的研究.

【关键词】 水稻； 均一化； cDNA文库； 测序； DNA芯片； 全生育期；
【基金】 国家自然科学基金(批准号:30070396);国家重点基础研究发展规划(批准号:G2000016202)资助项目.
  • 【文献出处】 科学通报 ,Chinese Science Bulletin , 编辑部邮箱 ,2002年21期
  • 【分类号】S511
  • 【被引频次】85
  • 【下载频次】653
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