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p62Dok PTB结构域融合蛋白的表达和纯化

Expression and purification of the GST fusion protein of p62Dok PTB domain

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【作者】 阎志勇； 吴爱群； 张勇； 由振东； 路长林； 周明明； 何成；

【Author】 YAN Zhiyong 1,2) ,WU Aiqun 2) ,ZHANG Yong 1) ,YOU Zhendong 1) , LU Changlin 1) ,ZHOU Mingming 1,3) ,HE Cheng 1) 1)Department of Neurobiology, the Second Military Medical University,Shanghai 200433 2)Department of Human Anato

【机构】 第二军医大学神经生物学教研室； 河南医科大学解剖学教研室； 第二军医大学神经生物学教研室 上海200433河南医科大学解剖学教研室郑州450052； 郑州45005；

【摘要】 目的 :制备p6 2DokPTB结构域的GST融合蛋白。方法 :用PCR方法扩增编码p6 2DokPTB结构域的cD NA ,并将其克隆入表达载体pGEX 4T 3中 ,转化大肠杆菌BL 2 1,构建成表达GST PTB融合蛋白的菌株。经IPTG诱导表达后 ,经Glutathion Sepharose 4B亲和层析柱纯化 ,用SDS PAGE进行分析 ,该融合蛋白的表达量超过菌体总蛋白的 2 5 %。结果 :获得重组GST PTB融合蛋白 ,纯度在 95 %以上 ,产物得率约 75 %。结论 :成功制备高纯度p6 2DokPTB结构域的GST融合蛋白 ,为进一步研究p6 2DokPTB结构域的结构和生物学功能奠定了基础。

【Abstract】 Aim:To produce the GST PTB domain fusion protein Methods:The cDNA encoding p62Dok PTB domain was amplified by using PCR method, and cloned into pGEX 4T 3 vector The expression plasmid was introduced into E coli strain BL 21 The GST PTB fusion protein accounted for over 25% of the total bacterial protein after IPTG induction, It was purified to homogeneity from the cell lysates via affinity chromatography and analyzed by SDS PAGE gel Results:The recombinant GST PTB fusion proteins were prepared with high purity, more than 95%, and high recovery, about 75% Conclusion: The established method for preparation large quantity recombinant GST PTB fusion proteins would promote the structure function analysis of the PTB domain of p62 Dok protein

【关键词】 p62Dok； PTB结构域； 重组蛋白；
【Key words】 p62Dok； PTB domain； recombinant protein；
【基金】 国家自然科学基金资助项目　 30 0 70 16 7;海外青年学者合作研究基金资助项目　 30 0 2 80 0 3;国家 973基金资助项目　G19990 5 40 0 0
  • 【文献出处】 河南医科大学学报 ,Journa of Henan Medical University , 编辑部邮箱 ,2001年04期
  • 【分类号】R346
  • 【被引频次】3
  • 【下载频次】56
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