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表皮生长因子受体体外测活的非同位素方法

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【作者】 葛高翔； 吴静； 林其谁；

【机构】 中国科学院上海生命科学院生物化学与生物细胞学研究所分子生物学国家重点实验室!上海 200031； 中国科学院上海生命科学院生物化学与生物细胞学研究所分子生物学国家重点实验室!上；

【摘要】 建立了一种表皮生长因子受体体外测活的非同位素方法．通过克隆表皮生长因子受体主要磷酸化位点 Ｔｙｒ１１７３周围 ２０肽的基因片段与谷胱甘肽 Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）的融合蛋白作为底物，用抗磷酸化酪氨酸的单克隆抗体ＰＹ９９来检测其磷酸化的程度．此方法在专一性及灵敏度上都比已有方法有显著提高．融合蛋白的Ｋｍ值（１０ｍｏｌ／Ｌ）比合成多肽底物的Ｋｍ值（１１０ｍｏｌ／Ｌ）要低一个数量级．此方法还可用于测定 ｃ－ｅｒｂ Ｂ２（Ｎｅｕ／ＨＥＲ２）的酪氨酸激酶活力．

【关键词】 表皮生长因子受体； 酪氨酸激酶； 非同位素； 融合蛋白； 体外；
【基金】 中国科学院重大资助项目!（批准号： KJ952－S1－15）
  • 【文献出处】 科学通报 , 编辑部邮箱 ,2000年22期
  • 【分类号】Q25
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】60
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