应用抑制差减杂交法分离水稻幼穗发育早期特异表达的基因

【摘要】 以水稻茎尖分生组织（ｓｈｏｏｔ ａｐｉｃａｌ ｍｅｒｉｓｔｅｍ， ＳＡＭ）为对照群体，幼穗分生组织（ｐｒｉｍａｒｙ ａｎｄｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｂｒａｎｃｈ ｐｒｉｍｏｒｄｉａ， Ｐｂ／Ｓｂ）为目标群体，进行抑制差减杂交．用经过ＳＡＭ ｃＤＮＡ差减的Ｐｂ／Ｓｂ ｃＤＮＡ群体构建了一个差减文库通过差示筛选鉴定了 ４０个在Ｐｂ／Ｓｂ中特异表达或表达增强的候选克隆．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交验证，至少４０％的候选克隆代表了在Ｐｂ／Ｓｂ中特异表达或表达增强的基因，同时，相当一部分克隆为低丰度转录本．对４０个ｃＤＮＡ克隆单向测序后，与ＧｅｎＢａｎｋ中同源序列进行比较，结果表明：２个克隆为已知水稻基因；１１个克隆与已知基因的同源性为６０％～９０％；另有１８个克隆在ＧｅｎＢａｎｋ中无法查到对应的同源基因，可能代表了新基因，或是由于序列位于变异丰富的３＇端故而无法查到与其他物种基因的同源性．目前为止，已有１９个基因在ＧｅｎＢａｎｋ注册并获登录号．更多还原