乙型肝炎病毒表面抗原蛋白基因的克隆及其在P815细胞中的表达

【摘要】 1　材料与方法1 1　质粒的构建ｐＣＰ10质粒含有ａｙｗ亚型ＨＢＶ全基因组。该质粒作为扩增Ｓ蛋白基因的模板 ,上、下游引物含ＢｇｌⅡ的酶切位点。Ｐ1:5′ＧＧＡＡＧＡＴＣＴＡＴＧＧＡＧＡＡＣＡＴＣＡＣＡＴＣＡＧＧ 3′,Ｐ2 :ＧＧＡＡＧＡＴＣＴＴＡＡＡＴＧＴＡＴＡＣＣＣ 3′画线部分分别为乙型肝炎 (乙肝 )病毒Ｓ基因上游 2 0个核苷酸和下游 14个核苷酸的义序列。按 94℃ ,30ｓ;5 5℃ ,30ｓ ;72℃ ,90ｓ扩增 30循环。ＰＣＲ产物纯化后 ,直接克隆到 ｐＧＥＭ Ｔｅａｓｙ载体上。用含氨苄青霉素的培养基筛选提取阳性克隆质粒 ,ＢｇⅡ切 ,低溶点胶法回收、纯化约 6 80ｂ更多还原