【作者】 杨辉；

【导师】 苏成芝； 张英起； 颜真；

【作者基本信息】 第四军医大学 ， 生物化学与分子生物学， 1999， 博士

【摘要】 正常细胞、肿瘤细胞在一定条件下能够产生具有血管形成活性的一系列细胞因子，其中血管形成素（Angiogenin，简称ANG）是这类蛋白中首次从肿瘤细胞分离获得的。ANG通过与血管内皮细胞表面的受体结合，介导其生物学活性。抑制ANG诱导的肿瘤血管形成作用，有可能达到抑制肿瘤生长，甚至杀伤肿瘤细胞的目的。 在本研究工作中，我们首先克隆表达了人血管形成素（Angiogenin）。从培养的人肺癌细胞系A549中提取总RNA，根据ANG cDNA序列合成5’，3’端引物，经RT-PCR扩增出ANG cDNA片段，测序证实与文献报道的完全一致。将ANG cDNA克隆入融合表达载体pRSETB，构建融合表达载体pRANG，转化大肠杆菌BL21DE3（pLysS），经IPTG诱导，表达了N端融合His6的ANG融合蛋白。光密度扫描结果表明，His6-ANG融合蛋白占菌体总蛋白的10％，表达产物分子量约为18ku，以包涵体形式存在。在8M脲存在条件下，包涵体溶解，利用His6与过渡态金属离子Ni²⁺高亲合力结合的性质，用Ni²⁺—NTA亲和树脂一步法纯化，即获得纯度达98％以上His6-ANG融合蛋白。活性测更多还原

【Abstract】 In some circumstance, tumor and normal host cells release some angiogenic factors. Angiogenin is the first factor isolated as a tumor-derived angiogenic factors and can induce the blood vessel formation.on the choriallantic membrane of the chick embryo. The biological activity of angiogenin is mediated through the binding to cell surface receptors. Blocking the interaction of angiogenin with its receptor most likely will inhibit the angiogenesis induced by angiogenin so that it can further inhibit the growth of tumor and kill the tumor cells.In our studies, we firstly cloned and expressed the human angiogenin. Total RNA was isolated from the human lung cancer cell line A549. The cDNA encoding hANG was amplified by reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR)method using the isolated total RNA as the template. The nucleotide sequence of the hANG cDNA was the same as the paper reported.Then it was inserted into the prokaryotic fusion更多还原