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二硫键稳定单链抗体融合PE38免疫毒素的构建及活性分析  
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【英文篇名】 Construction and activity analysis of a recombinant immunotoxin composed of PE38 and a disulfide stable single-chain antibody
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【作者】 王建丽; 郑玉玲; 王保莉; 郭霭光; 马茹; 姜永强;
【英文作者】 WANG Jian-li 1; 2; ZHENG Yu-ling1; WANG Bao-li2; GUO Ai-guang2; MA Ru1; JIANG Yong-qiang 1* 1Beijing Institute of Microbiology and Epidemiology; Beijing 100071; 2The College of Life Sciences; Northwest Sci-Tech University of Agriculture and Forestry; Yangling 712100; China;
【作者单位】 军事医学科学院微生物流行病研究所; 西北农林科技大学生命科学学院 陕西杨凌; 西北农林科技大学生命科学学院; 陕西杨凌;
【文献出处】 细胞与分子免疫学杂志 , Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology, 编辑部邮箱 2006年 01期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 单克隆抗体; B3; 二硫键稳定单链抗体; PE38; 肿瘤导向;
【英文关键词】 monoclonal antibody; B3; disulfide stable single-chain antibody; PE38; tumor targeting;
【摘要】 目的构建二硫键稳定单链抗体(B3dsscFv)融合PE38原核表达载体,实现其高效表达,并对初步纯化后的复性产物的稳定性、对肿瘤细胞的结合和杀伤活性进行测定。方法重叠PCR连接B3抗体的VH和VL片段,并将PCR产物克隆至pET22b表达载体(B3dsscFv-pET22b)。测序正确的PE38基因片段经酶切连接至B3dsscFv-pET22b,构建B3dsscFv-PE38-pET22b表达载体。IPTG诱导转化菌,将表达的包涵体进行变性、复性后用阳离子柱Q-Sepharose进行了初步纯化,ELISA测定此融合蛋白中单链抗体的结合活性及其在37℃的稳定性,并采用MTT法检测其对B3抗原表面阳性细胞HT-29的杀伤作用。结果双酶切鉴定表明成功地构建了B3dsscFv-PE38-pET表达载体,表达产物以包涵体形式存在,占总蛋白量的45%左右。复性后的B3dsscFv-PE38保持单链抗体的结合活性,并且对结肠癌HT-29细胞具有一定的杀伤作用,最大杀伤率可达96%。该蛋白在37℃孵育16h后,仍能保持大部分活性。结论所获B3dsscFv-PE38免疫毒素具备导向和杀伤肿瘤细胞的双重功能和良好的稳定性,为其研...
【英文摘要】 AIM: To construct the expression vector of a recombinant toxin composed of a disulfide stable single-chain antibody from mAb B3 and PE38 and examine the binding ability and cytotoxicity of the purified renatured products against the B3 positive carcinoma cells. METHODS: The V_H and V_L fragments of the mAb B3 were ligated by overlaping PCR and the resulting product was cloned to the pET22b expression vector. The PE38 fragment was inserted into the B3dsscFv-pET22b expression vector which was digested by EcoR...
【基金】 国家自然科学基金资助项目(No.30171091,30271478); 北京市自然科学基金资助项目(No.7022031)
【更新日期】 2006-02-14
【分类号】 R392
【正文快照】 由抗体或细胞因子等与毒素分子组合而成的免疫毒素用于肿瘤治疗是在现代医学生物学发展的基础上提出的一种新的治疗策略[1,2]。单克隆抗体(mAb)能特异性识别肿瘤相关抗原及细胞表面特异性抗原,因而是很有应用价值的免疫毒素载体。但mAb分子大、穿透力差,限制了其导向治疗的效果

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