禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测方法的建立-中国学术期刊网络出版总库

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禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测方法的建立

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【英文篇名】	Development of a Multiplex Real-time Reverse Transcriptase PCR Assay for Simultaneous Identification of Avian H5,H7 and H9 Hemagglutinin Subtypes
【下载频次】	★★★★★
【作者】	秦智锋; 吕建强; 肖性龙; 钟安清; 林镜中; 黄运生; 林庆燕; 陈书琨; 金显忠; 林苗; 刘胜利;
【英文作者】	QIN Zhi-feng~1; LV Jian-qiang~1; XIAO Xing-long~2; ZHONG An-qing~1; LIN Jin-zhong~2; HUANG Yun-sheng~1; LIN Qing-yan~1; CHENG Shu-kun~1; JIN Xian-zhong~1; LIN Miao~1; LIU Sheng-li~(1**)(1.Shenzhen Entry-Exit Inspection & Quarantine Bureau; Shenzhen 518045; China; 2.Shenzhen Taitai Genomics Incorporation; Shenzhen 518057; China);
【作者单位】	深圳出入境检验检疫局; 深圳太太基因工程有限公司; 深圳出入境检验检疫局深圳;
【文献出处】	病毒学报 , Chinese Journal of Virology, 编辑部邮箱 2006年 02期期刊荣誉：中文核心期刊要目总览 ASPT来源刊 CJFD收录刊
【中文关键词】	禽流感; H5亚型; H7亚型; H9亚型; 实时荧光RT-PCR; 多重实时检测;
【英文关键词】	AIV; H5 subtype; H7 subtype; H9 subtype; real-time RT-PCR; multiplex real-time identification;
【摘要】	为了对致病性强、危害性大的H5、H7、H9亚型禽流感病毒进行同时集成化快速检测,通过对GenBank已报道的禽流感病毒的HA基因进行序列分析比较,设计了H5、H7、H9 3个亚型的特异性引物和分别用3个荧光基团标记的Taqman MGB核酸探针。将各个亚型引物与探针优化组合,筛选出能够同时检测禽流感病毒H5、H7、H9 3个亚型、且对Ct值和扩增效率影响不大的3组引物和探针,建立了三重实时荧光RT-PCR方法。该方法特异性好,在我们检测的样品中,没有发现假阳性和假阴性现象。同时敏感性高,检测禽流感病毒H5、H7、H9亚型的敏感性分别达到1 0001、000、500个模板拷贝数;此外抗干扰能力强,对禽流感H5、H7、H9 3个亚型的不同模板浓度进行组合,仍可有效地同时检测3个病毒亚型。所建立的方法对保存的89个禽流感病毒样品进行检测,结果与经典检测方法(病毒分离鉴定、HA、HI)的符合率达100%。用上述建立的方法与鸡胚分离法同时对新鲜采集的4 000多份临床样品进行检测,两种方法的检测结果符合率为100%。
【英文摘要】	In order to simultaneously and massively identify the avian influenza virus subtypes of H5,H7 and H9 which are pathogenic and dangerous,H5,H7 and H9 hemagglutinin subtype-specific Taqman MGB probe marked with three different primer sets were developed based on all avian influenza virus HA sequences published in GenBank.A multiplex real-time reverse transcriptase PCR(RRT-PCR) assay was developed for the rapid detection of subtypes H5,H7 and H9 of avian influenza virus.The multiplex RRT-PCR assay was specific...
【基金】	本课题为深圳出入境检验检疫局科学研究与技术开发重大项目(SZK01-2004)
【更新日期】	2006-05-19
【分类号】	S854.43
【正文快照】	禽流感病毒血清亚型众多,抗原变异性强,宿主范围广泛,亚型之间无交叉保护性,使得禽流感频繁暴发,成为养禽业的一大毁灭性疫病。尤其是高致病性禽流感可导致高达100%的发病率和病死率,并可直接感染人并致人死亡,其生态学和公共卫生学意义已引起全世界人们的高度重视[1]。2003年?

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