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Fas配体基因逆转录病毒途径转染骨髓CD_(34)~+细胞  
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【英文篇名】 Human FasLcDNA transfected into bone marrow CD_(34)~+ cells with retrovirus viral
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【作者】 刘忠文; 邹萍;
【作者单位】 河南省人民医院血液病研究所; 华中科技大学附属协和医院血液病研究所 郑州; 430022;
【文献出处】 河南医药信息 , Henan Medical Information, 编辑部邮箱 2002年 18期  
期刊荣誉：ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 Fas配体; 基因转染; CD 34细胞;
【英文关键词】 Fas ligand; gene trans fection; CD 34 cell;
【摘要】 目的　借助逆转录病毒途径 ,FasL基因转染骨髓CD34+3 4 细胞。方法　将人FasLcDNA顺向插入逆转录病毒载体质粒PLXSN ;PLXSN -hFasL质粒脂质体转染PA317包装细胞 ;G418筛选抗生克隆 ;PCR鉴定整合细胞 ;扩增 ;制毒 :病毒滴度测定。试剂盒分选骨髓CD34+3 4 细胞 ;流式细胞仪分析其纯度 ;体外扩增培养 (IL -3+IL -6 +SCF) ;病毒上清转染CD34+3 4 细胞 ;流式细胞仪检测FasL阳性细胞率。结果　成功构建PLXSN -hFasL质粒 ;PA317细胞进行包装后所获假性病毒上清滴度为 1.7× 10 5CFU/ml ;对 11份正常人或良性贫血患者髓血进行CD34+3 4 细胞分选 ,所得CD34+3 4 细胞数为 1.35± 0 .45× 10 5,纯度为 85 %～ 97% ;体外扩增培养 10～ 12d ,细胞数达到 2 .5± 0 .7× 10 6(扩增约 18.5倍 ) ;病毒上清转染后 48～ 72h ,流式细胞仪检测 2 4.2± 2 .4%CD34+3 4 细胞表达FasL(P <0 .0 1) (未转染的CD34+3 4 细...
【英文摘要】 Objective To transfer human FasLcDNA into bone marrow CD + 34cells by replication defective retroviral viral.Methods The recombinant retroviral vector PLXSN-hFasLcDNA was constructured by cloning hFasLcDNA into the replication defective vector PLXSN,and transferred to packaging cell line PA317 by liposome.The G418 resistant colonies were selected,and,and the supernatants of the colony cultures were used to infect the human bone marrow CD + 34 cells.CD + 34 cells were isolated from bone marrow ...
【分类号】 R456
【正文快照】 将目的基因转入造血细胞并使之长期稳定表达 ,是造血细胞基因治疗的关键 ,而这一目标的实现需要选择合适的基因转移方法及造血细干 /祖胞的体外纯化、扩增。目前逆转录病毒基因转移系统是造血干细胞基因治疗中研究较深入、应用最广泛的途径 ,该途径能否有效地将外源基因转移到?

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