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棉铃虫幼虫中肠类胰蛋白酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达  
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【英文篇名】 CLONING OF A TRYPSIN-LIKE PROTEINASE GENE FROM THE MIDGUT OF COTTON BOLLWORM (HELICOVERPA ARMIGERA) LARVAE AND ITS EXPRESSION IN E.COLI
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【作者】 常团结; 陈蕾; 路子显; 陈宛新; 孟昆; 朱祯;
【英文作者】 CHANG Tuan Jie CHEN Lei LU Zi Xian CHEN Wan Xin Meng Kun ZHU Zhen ** (Institute of Genetics; Chinese Academy of Sciences; Beijing 100101; China);
【作者单位】 中国科学院遗传与发育生物学研究所; 中国科学院遗传与发育生物学研究所 北京;
【文献出处】 动物学报 , Acta Zoologica Sinica, 编辑部邮箱 2002年 06期  
期刊荣誉:ASPT来源刊  中国期刊方阵  CJFD收录刊
【中文关键词】 棉铃虫; 幼虫; 类胰蛋白酶; 同源性; 基因表达; 酶活性;
【英文关键词】 Cotton bollworm ( Helicoverpa armigera ); Larvae; Trypsin like proteinase; Similarity; Gene expression; Proteinase activity;
【摘要】 根据昆虫类胰蛋白酶序列的保守性设计了一对引物 ,以棉铃虫 (Helicoverpaarmigera)幼虫中肠总RNA反转录出cDNA第一链作为模板 ,利用RT PCR ,分离出了一种棉铃虫类胰蛋白酶 (HaT)基因的cDNA序列。分析表明该cDNA序列的开放阅读框为 6 96bp ,编码一个由 2 31个氨基酸残基组成的多肽 ,推测的氨基酸序列具有His57、Asp10 2 、Ser192 组成的电荷中继网 ,决定胰蛋白酶底物专一性的Asp189,底物结合部位的Gly2 16和Gly2 2 6残基 ,及其它胰蛋白酶结构上的保守区域。氨基酸序列同源性比较表明 :HaT同其它鳞翅目昆虫类胰蛋白酶有较高的同源性 ,同源性在 4 4 %~ 79%之间。为研究棉铃虫类胰蛋白酶基因 (hat)编码产物的活性 ,将其插入原核表达载体 pGEX4T 3和 pET2 3b中 ,并在大肠杆菌中进行了诱导表达 ,结果表明 ,GST HaT融合蛋白在大肠杆菌中进行了特异表达 ,非融合形式的表达产物HaT具有胰蛋白酶催化活性。
【英文摘要】 First strand cDNA was synthesized by reverse transcriptase using total RNA extracted from the midgut of Helicoverpa armigera larvae. With the first strand cDNA as template, and oligonucleotides designated on the conserved region in the trypsin like protease of insects and the reported sequence of Helicoverpa armigera as primers, a cDNA sequence encoding a trypsin like proteinase was amplified by RT PCR. The PCR products were cloned using the plasmid pBlueKS(+) as the vector. Insertion of the re...
【基金】 中国科学院特别支持费项目 (No STZ98 3 0 8); 国家“863”高技术计划基金 (No 2 0 0 1AA2 12 0 41和No 2 0 0 1AA2 2 2 2 5 1); 国家自然科学基金项目 (No 3 99890 0 1、No 3 9980 0 2 4和No 3 9880 0 2 3 ); 国家转基因植物研究与产业化开发专题基金 (No J99 B 0
【分类号】 S435.622
【正文快照】 棉铃虫是许多作物 ,如棉花、玉米、小麦的重要害虫 ,广泛分布于非洲、亚洲、印度、澳大利亚、太平洋和欧洲等地区 (Johnstonetal .,1991)。转基因植物的出现为抗虫工作开辟了一条新的途径。Hilderetal. (1987)获得了具有抗虫性的转蛋白酶抑制剂基因的烟?

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