应用基因组步移克隆小鼠Doc-1R基因组序列-中国学术期刊网络出版总库

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应用基因组步移克隆小鼠Doc-1R基因组序列

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【英文篇名】	Cloning of the mouse Doc-1R gene by genomic walking
【下载频次】	★★★★★
【作者】	生秀杰; 姜莉; 周伟强; 王太一; 张学;
【英文作者】	SHENG Xiujie 1; 2; JIANG Li 2; ZHOU Weiqiang 2; WANG Taiyi 1; ZHANG Xue 2. 1(Department of Laboratory Animal; China Medical University; Shenyang; Liaoning; 110001; P.R.China. E mail:Xjsheng@hotmail.com); 2(Department of Cell Biology; China M;
【作者单位】	中国医科大学实验动物部; 中国医科大学一院妇产科; 卫生部细胞生物学重点实验室;
【文献出处】	中华医学遗传学杂志 , Chinese Journal of Medical Genetics, 编辑部邮箱 2001年 04期期刊荣誉：CJFD收录刊
【中文关键词】	基因组步移; 基因克隆; Doc-1R基因;
【英文关键词】	genomic walking; gene cloning; Doc 1R gene;
【摘要】	目的　获得小鼠 Doc- 1R基因组序列。方法　根据小鼠 Doc- 1R基因的 c DNA序列设计、合成特异引物 ,应用基因组步移策略对小鼠基因组步移文库进行扩增。以含有特殊接头 (adaptor)的小鼠基因组步移文库作为模板 ,用巢式 PCR法扩增目的片段。结果　应用此方法得到约 1.5 kb的目的片段 ,经测序分析证实 Doc- 1R基因克隆成功。此基因含有 4个外显子、3个内含子 ,外显子与内含子接头符合 GT- AG法则。结论　基因组步移方法简单、可靠、有效 ,是一种比较理想的克隆基因组片段的方法
【英文摘要】	Objective To obtain the genomic sequences of the mouse Doc 1R gene. Methods Gene specific primers were designed and synthesized based on the cDNA sequences of the mouse Doc 1R gene. With the use of genomic walking strategy, the mouse genomic walking library was amplified by the polymerase chain reaction(PCR). Mouse genomic library constructed with a special adaptor was utilized as a template to amplify the desired fragment by nested PCR. Results A desired fragment of 1.5 kb was obtained. Sequence anal...
【基金】	国家“九五攻关”项目 (96- A2 30 60 2 ); 国家自然科学基金 (39980 0 1 1 )&&
【分类号】	R392-33
【正文快照】	既往获得基因组 DNA的方法主要是通过构建和筛选基因组文库 ,方法复杂 ,实验周期长 [1]。我们通过基因组步移策略 ,应用 PCR扩增方法获得小鼠 Doc-1R基因组片段。将 PCR产物与克隆载体相连接 ,转化感受态细菌 E.coli JM10 9中 ,获得重组克隆 ,通过PCR方法筛选阳性克隆 ,提取质?

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