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枯草蛋白酶E的定点突变及其对酶性质的影响  
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【英文篇名】 Site-directed Mutagenesis and Effects on the Enzymatic Properties of Subtilisin E
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【作者】 杨永华; 蒋岚; 杨胜利; 吴宇杰; 朱榴琴;
【英文作者】 YANG Yong\|Hua\ JIANG Lan\ YANG Sheng\|Li (Shanghai Research Center of Biotechnology; The Chinese Academy of Sciences; Shanghai 200233) WU Yu\|Jie\ ZHU Liu\|Qin (Institute of Biophysics; Beijing 100101);
【作者单位】 中国科学院上海生物工程研究中心; 中国科学院生物物理研究所;
【文献出处】 生物工程学报 , CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY, 编辑部邮箱 2000年 03期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 枯草蛋白酶E; 定点突变; 蛋白酶活性; 酯酶活性;
【英文关键词】 Subtilisin E; site\|directed mutagenesis; amidase activity; esterase activity;
【摘要】 用定点突变的方法研究S2 2 1C/P2 2 5A ,N118S/S2 2 1C/P2 2 5A ,D6 0N/S2 2 1C/P2 2 5A和Q10 3R/S2 2 1C/P2 2 5A突变对蛋白酶活性 ,酯酶活性与蛋白酶活性之比的影响。结果表明 :S2 2 1C/P2 2 5A突变使蛋白酶活性比枯草蛋白酶E低 730 0 0多倍 ,酯酶活性与蛋白酶活性之比是Subtiligase的 3倍 ;N118S/S2 2 1C/P2 2 5A突变使蛋白酶活性和酯酶活性分别比S2 2 1C/P2 2 5A突变下降 3 6倍和 15倍 ,酯酶与蛋白酶活性之比下降 4倍 ,同时增加变体酶的热稳定性 ;D6 0N/N118S/S2 2 1C/P2 2 5A突变使蛋白酶活性比N118S/S2 2 1C/P2 2 5A突变体下降 15倍 ,但对酯酶活性几乎没有影响 ,酯酶与蛋白酶活性之比增加 14倍 ,分别是S2 2 1C/P2 2 5A突变体和Subtiligase的 3 3倍和 10 3倍 ;但是 ,Q10 3R/N118S/S2 2 1C/P2 2 5A突变使蛋白酶活性比N118S/S2 2 1C/P2 2 5A突变体...
【英文摘要】 Site\|directed mutagenesis was used to investigate the effects of S221C/P225A,N118S/S221C/P225A,D60N/N118S/S221C/P225A and Q103R/N118S/S221C/P225A mutations on the properties of Subtilisin E.It was found that S221C/P225A mutant is 73 000\|fold decreased in amidase activity than subtilisin E and 3\|fold increased than subtiligase in the ratio of esterase/amidase;N118S/S221C/P225A mutant has 3\^6\|fold and 15\|fold decreased in amidase and esterase activity respectively and as a result,it has a 4\|fold lower ...
【基金】 国家高技术研究与发展计划项目资助!( 10 3 12 0 2 0 2 )
【分类号】 Q55
【正文快照】 枯草芽孢杆菌蛋白酶是重要的工业用酶 ,对其结构功能的理解及催化机理的研究已比较透彻 ,目前有关枯草杆菌蛋白酶以及变体酶的研究已超出水解性质的范畴 ,而拓展到多肽合成的应用研究[1～ 3] ,但是枯草蛋白酶催化酰胺水解的效率高 ,在催化多肽合成的过程中会引起底物及合成产物

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