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融合蛋白Rv3872/CFP-10/ESAT-6的制备及在牛结核诊断中的初步应用  
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【会议录名称】 中国奶业协会年会论文集2009（上册） , 2009 年
Proceedings of 2009 Annual Conference of Dairy Association of China
【作者】 刘冬光; 廖娟红; 于清龙; 陈颖钰; 陈焕春; 郭爱珍;
【作者单位】 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室; 华中农业大学动物医学院;
【会议名称】 中国奶业协会2009年会
【英文会议名称】 2009 Annual Conference of Dairy Association of China
【会议地点】 中国浙江杭州
【主办单位】 中国奶业协会
【学会名称】 中国奶牛编辑部
【主编】 魏克佳
【关键词】 牛结核; Rv3872; CFP-10; ESAT-6; 诊断;
【论文摘要】 本研究通过融合表达Rv3872、CFP-10和ESAT-6.以改良牛结核病特异性鉴别诊断抗原CFP-10-ESAT-6,提高牛结核抗体鉴别诊断法的灵敏度。利用PCR方法.克隆牛分枝杆菌RD1区上述三个基因,通过酶切连接方法,将三个基因串联在pET-28a载体上,基因之间用Linker序列连接。融合基因在大肠杆菌内经IPTG 0.4mmol L-1诱导3h,目的蛋白经SDS-PAGE证实表达在上清中.Western-blot分析证实表达蛋白具有免疫原性。以所表达的融合蛋白作为包被抗原建立间接ELISA.检测了44份牛分枝杆菌感染背景清楚的临床奶牛血清。26份阳性血清中,Rv3872-CFP-10-ESAT-6融合蛋白ELISA检出阳性样本18份.检测灵敏度为69%,而CFP-10-ESAT-6融合蛋白ELISA只检出阳性样本4份。18份阴性血清中,两种ELISA均检出17份阴性血清,特异性都为94(17/18)。因此,Rv3872-CFP-10-ESAT-6融合蛋白在对牛结核抗体检测特异性没有降低的情况下.敏感性获得了显著提高.这对牛结核病的早期鉴别诊断方法的建立具有重要意义。
【更新日期】 2012-01-14

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