刺桐胰蛋白酶抑制剂突变体在大肠杆菌中的表达及在TPA纯化中的应用-中国重要会议论文全文数据库

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刺桐胰蛋白酶抑制剂突变体在大肠杆菌中的表达及在TPA纯化中的应用

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【会议录名称】	微生物与人类健康科技论坛论文汇编 , 2009 年
【作者】	朱美财; 占志; 王雅静; 蔡庆;
【英文论文作者】	Zhu Mei-cai; Zhan Zhi; Wang Ya-jing; et al.(Department of Clinical Experiment; Air Force General Hospital; Beijing 100036; China);
【作者单位】	空军总医院临床检验中心;
【会议名称】	微生物与人类健康科技论坛
【会议地点】	中国北京
【主办单位】	北京微生物学会
【学会名称】	中国植物保护学会生物入侵分会
【关键词】	刺桐胰蛋白酶抑制剂突变体; 基因克隆; 原核表达;
【英文论文关键词】	Erythrina trypsin inhibitor Variant(rserETI); Gene cloning; Prokaryotic expression;
【论文摘要】	目的构建刺桐胰蛋白酶抑制剂突变体(rserETI)原核表达载体,制备表达产物用于TPA的纯化。方法设计合成了rserETI编码序列DNA片段,以PCR法扩增出全长编码区序列,经酶切后克隆到PET9a表达载体,转入大肠杆菌JM109DE3以IPTG诱导表达,表达产物经复性、QFF层析纯化后,与溴化氰活化的Sepharose耦联合成亲和层析柱,纯化重组TPA。结果 rserETI在表达大肠杆菌中占菌体蛋白的30%,复性率为80%,QFF层析纯化达电泳纯,耦联合成的rserETI-Sepharose亲和层析柱能特异性地纯化重组TPA。结论成功构建了rserETI原核表达载体,并在大肠杆菌高效表达,制备的表达产物可用于TPA的纯化。
【英文论文摘要】	Objective To construct a prokaryotic expression vector of Erythrina trypsin inhibitor Variant(rserETI) and use the expression product to purify recombinant tPA.Methods A gene coding for ETI with a subsitution of N-terminal aminal acid Val to Ser(rserETI) was designed.Twelve DNA primers based on the coding sequence for rserETI were synthesized.Full length DNA coding for rserETI was amplified by PCR,digested with restriction endonuclease and cloned into plasmid pET9a.The constructed recombinant plasmid pET9a/...
【更新日期】	2012-06-01

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