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NA-I株鹅源副粘病毒糖蛋白基因的原核表达载体  
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【会议录名称】 中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集 , 2008 年
【作者】 马爱霞; 丁壮; 李娜; 宋子运; 徐明; 宣华;
【英文论文作者】 Ma aixia Ding Zhuang Li na Song ziyun Xu ming Xuan hua(College of Animal Science and Veterinary Medicine; Jilin University; Changchun 130062);
【作者单位】 吉林大学预防兽医学国家重点学科动物重要病原与疫病研究室;
【会议名称】 中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会
【会议地点】 中国上海
【主办单位】 中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会
【学会名称】 中国畜牧兽医学会
【主编】 童光志、丁铲
【关键词】 鹅副粘病毒; 糖蛋白基因; 原核表达;
【英文论文关键词】 goose paramyxovirus; Glycoprotein gene; Prokaryotic Expression;
【论文摘要】 将NA-1株鹅源副粘病毒毒种接种于11日龄SPF鸡胚,收集36~72h死亡的鸡胚尿囊液。参考已发表的鹅源副粘病毒M基因序列,设计并合成了两对特异性引物,用以扩增鹅源副粘病毒NA-1株F、HN基因。预期扩增的基因片段包含完整的开放阅读框。通过RT-PCR扩增出鹅源副粘病毒NA-1株F、HN基因片段。琼脂糖凝胶电泳回收、纯化,得到F、HN基因片段.经EcoR I,Sal I消化。将F、HN基因克隆进入pET-28a载体,转化大肠杆菌DH5a,挑选菌落。经限制性核酸内切酶Sal I和EcoR I双酶切及PCR鉴定,结果证明重组真核表达载体pET-F、pET-HN构建成功,将构建的表达载体分别转化表达菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达。经SDS-PAGE分析,原核表达的F、HN蛋白分子量在59 Ku,63Ku,1 mM(终浓度)IPTG时间梯度诱导表达,3 h时F蛋白表达产量最高,占总菌体蛋白含量的23.9%;5 h时HN蛋白表达量最高,占整个菌体蛋白含量的26.2%;Western-blot检测发现原核表达的重组蛋白分别能与鼠抗GPMV阳性血清反应,证明原核表达的F蛋白、HN蛋白具有一定的反应原性。
【英文论文摘要】 GPMV NA-1 was multiplied by SPF embryonated eggs and purified,and then to extract the RNA genome of virus. Based on the complete genome sequence of goose paramyxovirus strain NA-1 logged in GenBank and then two pairs specific primers were designed to amplified M,F and HN genes fragment by the method of RT-PCR.Meanwhile,the target gene fragments were respectively cloned into the pET-28a and were dentificated by restriction enzyme digestion and sequencing analysis.The positive recombinant plasmids were named ...
【基金】 国家自然科学基金资助项目(批准号:30571375)
【更新日期】 2009-03-10

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