【英文题名】
Cloning and Tissue Expression of Functional Genes in Steroidal Saponins Biosynthesis from Paris Fargesii Franch
【作者】
江雪梅 ;
【导师】
刘学端 ;
【学位授予单位】
中南大学 ;
【学科专业名称】
生物工程
【学位年度】
2011
【论文级别】
硕士
【网络出版投稿人】
中南大学
【网络出版投稿时间】
2011-10-17
【基金】
973计划;创新研究群体科学基金;国家科技基础条件平台;
【关键词】
球药隔重楼 ;
RACE ;
3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶 ;
Real-time ;
PCR ;
【英文关键词】
Paris fargesii Franch ;
RACE ;
3-hydroxy-3-methyl coenzyme A reductases ;
Real-time PCR ;
【中文摘要】
甾体皂甙是一类药用价值较高的次生代谢产物,探索和研究它的合成途径,并实现其代谢调控,对促进中医药现代化发展具有重大意义。球药隔重楼(Paris fargesii Franch)是百合科重楼属的一种,它具有清热解毒、止血、止痛的功效,主要药效成分是甾体皂甙。甾体皂甙是通过甲羟戊酸途径合成的,而3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)是该途径的第一个限速酶。
本论文首次成功提取了球药隔重楼的总RNA,通过比对其他种属HMGR基因,找出它们的同源保守序列,扩增出目的基因的保守片段、3’和5'cDNA拼接,克隆得到了HMGR的全长cDNA,命名为PfHMGR,大小为1973 bp,编码576个氨基酸。PfHMGR的生物信息学分析显示,其蛋白分子量约为61 kDa,理论等电点为6.64,与其他植物的HMGR基因具有较高的同源性,有两个HMG-CoA结合位点和两个NADP(H)结合位点,包括两个跨膜区域和三个催化区域。
本论文首次构建了PfHMGR基因的大肠杆菌表达载体并将其转化到大肠杆菌中表达,其表达鉴定结果显示PfHMGR能够替代AtIPI基因的功能,促进了类胡萝卜素的积累,即PfHMGR在大...
【英文摘要】
Steroidal saponins is a kind of secondary metabolites with high medicinal value, to explore and study its synthetic pathway and realize its metabolic regulation has a great significance for the modernization of Chinese medicine.
Paris fargesii Franch is a genus of Paris Liliaceae, which has the effects of heat-clearing and detoxifying. And steroidal saponins is the major medicinal effective ingredient of it. Steroidal saponins is synthesized by the mevalonate pathway and 3-hydroxy-3-methyl coenzyme A re...
【更新日期】
2011-12-06
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