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扩展青霉脂肪酶热稳定性的分子突变  
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【英文题名】 Improving Thermostability of the Penicillium Expansum Lipase by Molecular Mutagensis
【作者】 刘燕雅;
【导师】 林琳;
【学位授予单位】 福建师范大学;
【学科专业名称】 微生物学
【学位年度】 2010
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 福建师范大学
【网络出版投稿时间】 2011-05-05
【关键词】 扩展青霉脂肪酶; 定点突变; 随机突变; 易错PCR;
【英文关键词】 Penicillum expaasum lipase; Site-directed mutagenesis; Random mutagenesis; error-prone PCR;
【中文摘要】 本研究利用定点突变和随机突变的方法,对扩展青霉脂肪酶(Penicillium expansum lipase, PEL)进行了蛋白质工程改造。 1.PEL的定点突变 采用重叠延伸PCR的方法,对扩展青霉脂肪酶进行多个点突变,选取了十一个突变位点,构建了7个单点突变体和8个叠加突变体(与随机突变体ep8叠加)。将获得的突变基因在毕赤酵母中表达,并进行酶学性质的研究。 (1)P197E的单点突变及叠加突变：PEL-P197E酶活为556U/mL,Tm值比野生型提高了0.90C。PEL-ep8-P197E酶活为592U/mL,其Tm值比野生型脂肪酶PEL的提高2.80C,比随机突变体PEL-ep8提高2.2℃；此外,叠加突变体PEL-ep8-P197E的底物特异性发生了改变。 (2)K152R的单点突变及叠加突变：PEL-K152R酶活为530U/mL,PEL-ep8-K152R酶活为416U/mL,二者的热稳定性与与野生型无明显差别。 (3)P102L的单点突变及叠加突变：PEL-P102L酶活为300U/mL。PEL-ep8-P102L的酶活为612U/mL,最适作用温度...
【英文摘要】 In order to improve the enzyme properties of the Penicillum expaasum lipase(PEL), the PEL gene was mutated by site-mutagenesis and random mutagenesis. 1. Site-directed mutagenesis of PEL In order to improve the thermostability of Penicillium expansum lipase (PEL), Eleven mutations were created by site-directed mutagenesis. Mutations were generated by overlap extension PCR using the cDNA of wild-type lipase gene(lip07) or a single site mutant lipase ep8 as the template and two special primers that corres...
【更新日期】 2011-07-20

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导师：林琳    导师单位：福建师范大学    学位授予单位：福建师范大学
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