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不同农杆菌介导人胰岛素基因转化银耳及ELISA法检测表达产物  
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【英文题名】 Different Agrobacterium Tumefaciens-mediated Transformation of Human Insulin Gene to Tremella Fuciformis and Detection Expression Products by ELISA
【作者】 张文瑞;
【导师】 谢宝贵;
【学位授予单位】 福建农林大学;
【学科专业名称】 生物化学与分子生物学
【学位年度】 2011
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 福建农林大学
【网络出版投稿时间】 2011-09-28
【关键词】 银耳芽孢; 农杆菌介导转化; 胰岛素检测; ELISA;
【英文关键词】 Yeast-like conidia of Tremella fuciformis; Agrobacterium tumefaciens-mediate- d transformation; Insulin detection; Enzyme linked immunosorbent assay;
【中文摘要】 在实验室已初步建立的农杆菌EHA105介导银耳转基因方法的基础上,以银耳潮霉素敏感菌株Tr21-01为出发菌株,通过冻融法将携带有潮霉素磷酸转移酶(Hph)基因为遗传标记及人胰岛素基因(BAC)为目的基因的质粒pBHg-BCA导入根癌农杆菌GV3101,LBA4404和AGL-1中,并进一步介导转化银耳进行研究。实验结果发现:AGL-1具有较高的转化率;GV3101转化率较低,且假阳性较高;LBA4404无抗性菌落长出。此结果表明不同的农杆菌侵染银耳芽孢能力具有差异性,且对受体侵染具有一定的特异性。 本实验以农杆菌EHA105为参照菌株,对农杆菌AGL-1介导转化银耳进行研究。基于农杆菌介导转基因受诸多因素的影响,本实验从农杆菌与银耳芽孢共培养时间、银耳芽孢浓度、农杆菌浓度、诱导剂乙酰丁香酮(AS)的浓度、转化菌株阳性比率等方面进行优化。其转化条件优化结果为:AGL-1菌液OD值为0.4~0.5,AS诱导培养浓度为250μg/mL、共培养浓度为150μg/mL,银耳芽孢浓度为10~8/mL,共培养72h转化率最高,可达500个/10~8,且阳性菌落为89%;EHA105菌液OD值为0.4~0.5,A...
【英文摘要】 In accordance with the transgenic methods of Tremella fuciformis mediated by Agrobacterium EHA105 that previously established in our laboratory, our experiments used one hygromycin sensitive strain of Tremella fuciformis named Tr21-01 as a original strain. In our research, with the method of Freeze-thaw, the plasmid pBHg-BCA which consisted of the human insulin BCA gene as objective gene and hygromycin phosphotransferase gene as genetic markers transformed Tremella fuciformis mediated by Agrobacterium GV310...
【更新日期】 2011-10-26

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导师:谢宝贵    导师单位:福建农林大学    学位授予单位:福建农林大学
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