【英文题名】
The Study of the Construction of the T Vector and Expression Vector with Maize CobA Gene as the Red Fluorescent Reporter
【作者】
张宽亮 ;
【导师】
范军 ;
【学位授予单位】
安徽农业大学 ;
【学科专业名称】
生物化学与分子生物学
【学位年度】
2010
【论文级别】
硕士
【网络出版投稿人】
安徽农业大学
【网络出版投稿时间】
2011-01-11
【基金】
国家自然科学;
【关键词】
玉米UPMT ;
筛选标记 ;
大肠杆菌 ;
菌落红色荧光 ;
【英文关键词】
Maize UPMT ;
Selectable marker ;
E.coli ;
Colonies of red fluorescent ;
【中文摘要】
尿卟啉原Ⅲ甲基化酶(Uroporphyrinogen methyltransferase, UPMT)是维生素B12的分支合成关键酶,也是一种新型荧光蛋白。但是,和绿色荧光蛋白相比,它的应用研究报道较少。本文以玉米UPMT作为筛选标记,分别研究了基因插入和融合表达对重组大肠杆菌菌落红色荧光的影响,取得如下结果：
1.分析了玉米UPMT编码基因cobA在大肠杆菌不同启动子下的本底表达。结果表明：cobA基因在Lac, T5, Trc和Tac启动子下均有本底表达,转化菌斑呈红色；但是,它在T7和araBAD启动子下无本底表达。
2.分析了玉米UPMT编码基因cobA在Lac启动子下不同菌株的表达水平。结果表明：DH5a、JM109、XL-Bluel和TG1菌株形成的菌斑,长紫外灯下菌落荧光没有明显差异。
3.构建了基于玉米UPMT插入失活的大肠杆菌T载体,分析了不同长度片段的插入效果和插入一个500 bp片段的克隆效率。结果表明：250 bp,370 bp,420 bp,1000bp和1800 bp不同长度片段均能装入该T载体。该T载体中插入TCA三核苷酸,编码一...
【英文摘要】
Uroporphyrinogen III methyltransferase (UPMT), a key regulatory enzyme in the branches synthesis of vitamin B12, is a novel red fluorescence indicator. There are a few reports on the application. In this study, we studied the inactive insertion of the maize UPMT and the soluble protein expression using the UPMT as the reporter. The results as followed:
1. The background expression for cobA gene encoding maize UPMT under different promoters in E.coli was analyed. The cobA gene with the backgrou...
【更新日期】
2011-03-04
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