华根霉（Rhizopus chinensis）前导肽和成熟肽脂肪酶在E.coli中的克隆表达和酶学性质研究 在线阅读 整本下载 分章下载 分页下载 本系统暂不支持迅雷或FlashGet等下载工具
【英文题名】
Expression of Pro-and Mature Rhizopus Chinensis Lipases in E.coli and Their Characteristics
【作者】
李飏 ;
【导师】
徐岩 ;
【学位授予单位】
江南大学 ;
【学科专业名称】
发酵工程
【学位年度】
2008
【论文级别】
硕士
【网络出版投稿人】
江南大学
【网络出版投稿时间】
2009-02-07
【关键词】
华根霉 ;
前导肽脂肪酶 ;
成熟肽脂肪酶 ;
克隆 ;
表达 ;
亲和层析 ;
性质 ;
【英文关键词】
Rhizopus chinensis ;
Prolipase ;
Mature lipase ;
Cloning ;
Expression ;
affinity chromography ;
Characteristics ;
【中文摘要】
根霉脂肪酶是一类典型的微生物脂肪酶,其独特的催化特性使其在脂肪酶理论研究和实际应用中都占有重要地位。华根霉脂肪酶(Rhizopus chinensis lipase, RCL)在酯类物质的合成、生物柴油和手性化合物的制备等重要工业实践中表现出良好的应用价值。对华根霉脂肪酶进行克隆表达以及酶学性质研究,为进一步开展华根霉脂肪酶的理论和应用研究提供了一定基础。
为了较全面的认识华根霉脂肪酶,准确表达不同脂肪酶的基因片段,指导其工业应用,本文从华根霉(Rhizopus chinensis CCTCCM201021)基因组中PCR扩增出前导肽脂肪酶基因(proRCL)和成熟肽脂肪酶基因(mRCL)并将其克隆到原核表达载体pET-28a中,构建了重组表达质粒,并在E.coli BL21中实现了具有活性的表达,表达产物SDS-PAGE分析表明,表达的前导肽脂肪酶分子量约43 kD,成熟肽脂肪酶分子量约33 kD,与预期分子量相同。优化表达条件,能获得活性相对较高的重组蛋白。收集菌体,超声破碎上清液经镍离子亲和层析,纯化得到目的蛋白。
对重组ProRCL和MRCL主要酶学性质进行了研究,发现...
【英文摘要】
Rhizopus lipase is a typical kind of Microbial Lipase, which has a important role in theoretical research and practical application, because of their particular catalytic characteristics. Rhizopus chinensis lipase (RCL) has good application in industrial practice, such as synthesis of esters, preparation of biodiesel and chiral compounds. Expression Rhizopus chinensis lipases and research their characteristics was the basic of further research for theoretical and application of RCL.
To reach rel...
【更新日期】
2009-02-17
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