猪传染性胃肠炎(Transmissible Gastroenteritis virus of swine,TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible Gastroenteritis vires of swine,TGEV)引起的一种高度接触性肠道传染病,临床症状主要表现为发病仔猪严重腹泻、呕吐和脱水,该病给我国养猪业造成了巨大的经济损失。本研究以TEGV重组N蛋白为免疫抗原,成功制备了抗TGEV重组N蛋白单克隆抗体,对TGE的诊断、预防和控制具有较大的意义。
1、TGEV重组N蛋白的制备、纯化与鉴定
将猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因重组表达质粒pET-32a-N转化大肠杆菌,IPTG诱导表达后获得融合N蛋白,SDS-PAGE检测大小约67KD。大部分重组N蛋白以包涵体形式表达,采用金属离子亲和层析方法在变形条件下纯化。实验确定以20mM咪唑浓度的PBS缓冲液为杂蛋白的清洗缓冲液,以100mM咪唑浓度的PBS缓冲液为TEGV重组N蛋白的洗脱缓冲液。纯化后获得了高纯度的N蛋白,SDS-PAGE观察为单一清晰的条带,经核酸蛋白测定仪测定该蛋白浓度为1500μg/...
【英文摘要】
Porcine transmissible gastroenteritis (TGE) is a highly contagious, enteric disease of swine caused by porcine transmissible gastroenteritis virus. The main clinical symptoms of infected pigs is vomiting、diarrhea and dehydration. TGE have lead to enormous loss to pig breed .In this study, monoclonal antibodies against recombinant nucleoprotein of TGEV SC-H isolate was development which be significant to diagnosis、prevention and control of TGE.
1. Preparation, purification and identification of r...
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