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“拯救”鹅源副粘病毒NA-1株辅助质粒的构建及鉴定  
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【英文题名】 Construction and Identification of the Helper Plasmids for Rescuing Goose-host Paramyxovirus Strain NA-1
【作者】 宋子运;
【导师】 丁壮;
【学位授予单位】 吉林大学;
【学科专业名称】 预防兽医学
【学位年度】 2007
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 吉林大学；宋子运
【网络出版投稿时间】 2007-08-02
【关键词】 鹅源副粘病毒; NA-1株; 反向遗传操作; 病毒拯救; 辅助质粒;
【英文关键词】 Goose-host Paramyxovirus; strain NA-1; Reverse genetics; Rescue virus; Helper plasmids;
【中文摘要】 本研究将本实验室分离、鉴定并纯化的NA-1株鹅源副粘病毒进行了基因组RNA的提取,以GenBank收录的ZJ1株鹅源NDV全基因组核苷酸序列为模板设计5对特异性引物,通过RT-PCR方法分段扩增了NP、P和L基因核苷酸序列。 本研究为“拯救”鹅源副粘病毒NA-1株而构建的3个辅助质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L,将其分别转染Vero细胞,经G418筛选后,通过间接免疫荧光试验、SDS-PAGE、Western blot来鉴定构建的3个辅助质粒。构建的辅助质粒为鹅源副粘病毒NA-1株的反向遗传操作以及有关功能基因组研究奠定基础。 实验研究表明,副粘病毒V蛋白与毒力强弱有关。本研究模拟副粘病毒“RNA编辑”现象,在2次PCR反应过程中,扩增获得了V基因的全长cDNA。将获得的V基因亚克隆到pCI-neo中,将构建的真核表达质粒pCI-V转染Vero细胞,进行间接免疫荧光试验获得绿色荧光,说明真核表达质粒能够表达V蛋白,表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot试验,用全病毒高免血清进行Western blot检测,出现特...
【英文摘要】 Newcastle disease (ND) is a serious avian disease with worldwide distribution that can cause severe economic losses in the poultry indusity.The causative agent of the disease, Newcastle disease virus (NDV) or avian paramyxovirus type 1, is a member of the Paramyxoviridae and has been assigned to the genus Rubulavirus in the subfamily Paramyxovirinae. Avian Paramyxovirus consisted of nine serotypes, APMV 1~9, but APMV-1 only included Newcastle disease virus. There existed tremendous virulence d...
【更新日期】 2007-08-10

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导师：丁壮    导师单位：畜牧兽医学院    学位授予单位：吉林大学
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