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GST融合随机肽库的建立及其抗肿瘤活性研究  
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【英文题名】 The Construction of GST Fusion 15-peptide Library and the Detection of Its Anti-tumor Activity
【作者】 王明辉;
【导师】 王勤;
【学位授予单位】 兰州大学;
【学科专业名称】 生物物理学
【学位年度】 2006
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 兰州大学
【网络出版投稿时间】 2006-07-27
【关键词】 多肽; 肽库; 重组蛋白; MTT;
【英文关键词】 polypeptide; peptide library; recombinant protein; MTT;
【中文摘要】 肽库的传统建立方法为噬菌体展示技术,这种技术无法将肽库内每个多肽片段单独表达出来并在功能上和结构上加以筛选比较,在大规模应用和比较中无法实现肽库的更多价值,本研究拟利用基因工程的方法建立一种与噬菌体展示技术不同的肽库。在设计随机十五多肽序列后,将多肽序列重组到载体pGEX4T-1中,然后转化重组质粒到E.coli DH5a感受态细胞内,得到的肽库容量在2.5×10~4左右。我们随机挑取有外源插入的一百个重组质粒,转化到E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,以IPTG诱导表达重组蛋白,用SDS-PAGE方法检测多肽表达效率,将有表达的重组蛋白以溶菌酶进行裂解,以SDS-PAGE检测重组蛋白表达方式,取在上清表达的36个重组蛋白利用免疫亲和层析技术以Glutathione Sepharose4B将重组蛋白纯化并利用BSA为参照标准粗定量其浓度,以MTT方法检测其对肿瘤细胞HeLa生长活性的影响,结果显示所纯化的大部分重组蛋白对HeLa肿瘤细胞的生长具有一定的抑制作用。本研究表明利用基因工程方法建立随机15肽库是完全可行的,并对以后多肽的功能研究奠定了良好的基础。
【英文摘要】 The classical construction of the peptide library is the phage-display technology, but with this method, every peptide in the peptide library can not be expressed solely and screened on basis of its function and structure. Further value of the peptide library can not be implemented in the extensive application and comparison. Purpose of our research is to construct a peptide library with the method of the gene-engineering technology which is distinguishing to the phage-display technology. In this peptide li...
【更新日期】 2006-09-13

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导师：王勤    导师单位：兰州大学    学位授予单位：兰州大学
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