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人TRAb噬菌体抗体库的初建  
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【英文题名】 The Construction of Human TRAb Phage Antibody Library
【作者】 赵禹;
【导师】 陈昆明;
【学位授予单位】 天津医科大学;
【学科专业名称】 内科
【学位年度】 2003
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 天津医科大学
【网络出版投稿时间】 2003-09-11
【基金】 国家自然科学基金
【中文摘要】 本实验的目的是通过半套式RT-PCR扩增甲亢(Graves病)患者样品单个核细胞中抗体可变区编码基因V_H，V_L，并运用重叠伸展PCR技术将连接序列(Gly_3Ser)_3组装成单链基因(Scfv)并克隆到噬菌体中建立TRAb(促甲状腺激素受体抗体)单链噬菌体抗体基因组合文库。为进一步，筛选人源TSAb(甲状腺刺激抗体)，TSBAb(促甲状腺激素受体阻断抗体)．抗体活性片段打下基础。 方法：(1)TRAb单链抗体基因(ScFv)的构建：从TRAb，TSI均阳性Grave’s病患者的外周血中分离单个核细胞，提取mRNA。并反转录成cDNA。分别以人Vκ5’可变区兼并引物(与第一骨架区互补)，人Vκ3’兼并引物(部分与J段互补)PCR扩增抗体轻(V_L)链可变区基因。以人V_H5’兼并引物(与第一骨架区互补)，人V_H3’可变区兼并引物(与J段互补)PCR扩增抗体重(V_H)链可变区基因。然后，用重叠剪切PCR(SOE)方法，将V_H和V_L用一个linker(人工合成的36个寡核苷酸序列)连接起来(V_L-linker-V_H)，构建人单链抗体库(sing...
【英文摘要】 My assignment is to construct a TRAb (TSH receptor antibody) combinatorial library phage antibody library from Graves patients. Methods: VL -linker- VH preparation. mRNA was extracted from peripheral blood lymphocyte (about 15 ml)of Graves patients who's TRAb and TSI were positive (detected by TRAb.TSI Assay Kit)using GffiCO' TRIZOL reagents. cDNA cloning was done by the Reverse Transcription System(Promega). Diverse libraries of immunoglobulin light (VL) chain variable gene was ampli...

【相同导师文献】

导师：陈昆明    导师单位：天津医科大学    学位授予单位：天津医科大学
[1] 段丽君.人TRAb单链组合文库的构建[D]. 天津医科大学,2005
[2] 赵禹.人TRAb噬菌体抗体库的初建[D]. 天津医科大学,2003
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