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苹果果实cDNA文库的构建  
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【英文题名】 Constructing cDNA Library of Apple Fruits
【作者】 耿雪青;
【导师】 张大鹏;
【学位授予单位】 中国农业大学;
【学科专业名称】 果树学
【学位年度】 2003
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 中国农业大学
【网络出版投稿时间】 2003-09-09
【关键词】 新红星苹果; RNA提取; cDNA合成; cDNA文库;
【英文关键词】 M. Red storking fruit; RNA extract; cDNA synthesize; cDNA library;
【中文摘要】 本实验以新红星苹果为研究材料,采用CTAB法成功的从苹果果实里提取了高质量的RNA。利用MMLV反转录酶把总RNA中的mRNA反转录成cDNA,用特异引物进行LD—PCR扩增合成双链cDNA。然后用CHROMA SPIN—400Column对cDNA进行分级分离,去除小于500bp的cDNA片段。用带有粘性末端双链cDNA与λ Trip Ⅰ Ex2载体连接,利用λ噬菌体包装蛋白对合成的双链cDNA进行体外包装。包装产物侵染E.coli XL-Blue后构建cDNA文库,最后进行文库的扩增。该cDNA文库的滴度为1.191×10~6,文库的克隆数为1.112×10~6,扩增后滴度为1.532×10~10,插入片段平均大小在1 kb左右,蓝白斑筛选证实其重组率大于95%。同时,由于反转录过程中采用附加序列的方法使全长mRNA得到反转录,所以得到的cDNA是完整的,完全符合cDNA文库的要求。本实验成功构建了新红星苹果果实cDNA文库。
【英文摘要】 A high quality cDNA library of M. Red stark ing fruit has been constructed. The total RNA of apple fruits has been extracted by using CTAB method. The single strand cDNA was synthesized from mRNA with MMLV reverse transcriptase, then double strand cDNA was synthesized by using PCR. Double strand cDNA size fractionation was completed by CHROMA SPIN-400 column, so the low molecular weight cDNA fragments shorter than 500 bp could be removed out. cDNA was packaged using the A. phage packaging system...

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导师:张大鹏    导师单位:中国农业大学    学位授予单位:中国农业大学
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