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TrxA-EstB1融合蛋白的表达、纯化与活性分析  
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【英文题名】 Expression of TrxA-EstB1 Fusion Protein and Its Purification, Characterization of Enzyme Activity
【作者】 张丽青;
【导师】 闫艳春; 张宪省;
【学位授予单位】 山东农业大学;
【学科专业名称】 植物学
【学位年度】 2003
【论文级别】 硕士
【网络出版投稿人】 山东农业大学
【网络出版投稿时间】 2003-07-15
【关键词】 酯酶; 融合表达; TrxA-EstB1融合蛋白; 固定化; 纯化;
【英文关键词】 EsteraseB1; Fusion expression; TrxA-EstB1 fusion protein; Immobilization; Purification;
【中文摘要】 农药的大量施用不仅对环境造成严重污染,而且使大量害虫产生抗药性。其中抗性库蚊产生大量酯酶对农药起代谢作用是其产生抗药性的主要原因,抗药性的产生加大了农药治虫的难度,加剧了农药对环境的污染。然而,将抗性蚊虫产生的解毒酶用于农药污染的生物治理是环境污染治理的新思路、新方向,有较好的应用前景。本文旨在将解毒酶酯酶B1基因融合高效表达,为其实际应用创造条件。 本文将从抗性库蚊(Culex pipiens)中分离出的解毒酶基因和硫氧还蛋白融合表达载体pThioHisA用限制性内切酶EcoRI消化,用低熔点胶回收消化片段并纯化,纯化后的载体脱磷,在T4 DNA连接酶作用下将二者进行体外连接,将连接产物转化大肠杆菌DH5α,在100μg/L氨苄青霉素平板上筛选Ampr转化子,将重组质粒分别经BglⅡ、BamHI单酶切,电泳分析获得酯酶基因插入方向正确的融合表达质粒,命名为pThioHisA-B1。 挑取鉴定正确的单菌落,接种于2ml含氨苄青霉素(50μg/ml)的LB培养基中,37℃,180rpm培养过夜,次日按5%接种量转接1次,同样条...
【英文摘要】 The use of insecticides does not only bring benefit to human beings but also cause serious environmental pollution. Many insects including Culex pipiens can product detoxificase that can catalyze and degrade many xenobiotic agents besides pesticides, so it becomes harder to kill them. But the use of insect detoxificase provides a novel method in bioremediation of pesticides contamination ,so this thesis is aimed at fusion expressing the detoxificase(esterase B1) at high level. It will pave the w...

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