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抗虫基因载体的构建及白菜转基因研究

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【英文题名】	Construction of the Insect-resistant Gene Vector and Study on the Transgene of Chinese Cabbage
【作者】	曹传增;
【导师】	蔡民华; 刘凡;
【学位授予单位】	首都师范大学;
【学科专业名称】	遗传学
【学位年度】	2003
【论文级别】	硕士
【网络出版投稿人】	首都师范大学
【网络出版投稿时间】	2003-06-20
【关键词】	真空渗入转化法; 不结球白菜; 双价抗虫载体; 蜘蛛杀虫肽; 蛋白酶抑制剂;
【英文关键词】	Vacuum infiltration transformation; Brassica campestris L.ssp. chinensis; Double insect-resistant vector; Spider insecticidal protein; proteinase inhibitor;
【中文摘要】	蜘蛛杀虫蛋白(Spider insecticidal protein,SIP)基因可编码一种只有37个氨基酸的小肽，该多肽能杀死多种有害昆虫。质粒pBBBast-PinⅡ含有马铃薯蛋白酶抑制剂基因PinⅡ(Potato proteinase inhibitor Ⅱ)，PinⅡ基因编码的蛋白酶抑制剂具有广谱抗虫性。实验以蜘蛛杀虫肽基因为目的基因，将其转入质粒pBBBast-PinⅡ中，从而构建含有PinⅡ和SIP两个抗虫基因的双价植物表达载体——pBBBast-PinⅡ-SIP。同时，还将SIP基因转入pBBBast中，构建单价抗虫载体pBBBast-SIP。经过限制性内切酶酶切以及PCR目的片段扩增证明两个载体构建正确。通过真空渗入和花序浸渍法，将上述双抗和单抗基因分别导入白菜不结球类型——49菜心中，获得了7棵抗性株。通过对标记性状——除草剂抗性的活体及离体检验(氯酚红法)、目的基因PCR扩增、PCR-Southern杂交等方法证实目的基因已整合到小白菜基因组中。其中2棵抗性株自交后代的遗传分析表明，真空渗入法所得的转化株为杂合体，且其分离比符合3：1...
【英文摘要】	Spider insecticidal protein (SIP) gene can encode a small polypeptide containing 37 amino acids. The polypeptide has strong toxicity to many insects. Plasmid pBBBast-PinII has the Potato proteinase inhibitor II (Pin II ) gene which encodes potato proteinase inhibitor. The SIP gene was digested by restriction enzyme Hindlll and inserted into the vector pBBBast-Pin II . So a plant expression vector with two insect-resistant genes -pBBBast-Pin II -SIP was constructed. A plant expression vector - pB...

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