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白菜抗虫转基因研究

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【英文题名】	The Research of Insect-resistant Transgene of Chinese Cabbage
【作者】	张军杰;
【导师】	黄玉碧; 刘凡;
【学位授予单位】	四川农业大学;
【学科专业名称】	作物遗传育种
【学位年度】	2002
【论文级别】	硕士
【网络出版投稿人】	四川农业大学
【网络出版投稿时间】	2002-10-23
【关键词】	结球白菜; 不结球白菜; 转基因; 叶盘法; 真空渗入法; 农杆菌; 抗虫; Pin; Ⅱ;
【英文关键词】	Brasscia campestris L ssp.Pekinensis; Brassica campestris L.ssp.chinensis; transgene; Agrobacterium tumefaciens; vacuum infiltration method; Pin Ⅱ; insect-resistant;
【中文摘要】	以具有广谱抗性的马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因(PinⅡ)为目的基因，利用限制性内切酶，去除质粒载体p~(BBBS-pinⅡ)中PinⅡ基因的内含子部分，并转入农杆菌株C58用于植物转化。同时将具有高度专—抗性的蜘蛛杀虫蛋白(SIP)基因插入带有GUS、bar基因的p~(SHK)植物表达载体中，经限制性酶切，证明载体构建正确。以13种结球白菜的带柄子叶为外植体，在含BA 2mg／L、NAA 1mg／L、AgNO_3、3mg／L的MS培养基上筛选出再生率较高的北京80号、小杂66等三种基因型。然后以这三种基因型为转化材料，利用胭脂碱型根癌农杆菌C58(Ti质粒含有bar、PinⅡ基因)感染带柄子叶外植体，获得5个转基因植株。经PCR、PCR-Southern杂交以及植物基因组Southern杂交证实目的基因已经整合入植物基因组中。在进行基因转化的同时，确定了适合“北京80号”的Basta初始筛选浓度为4mg／L，提出了以抗性株真叶再生为基础消除抗性株嵌合体的方法。最后进行了转化株的抗虫性鉴定，主要表现为抑虫效应。通过真空渗入法转化...
【英文摘要】	The intron of the pin Ⅱ gene in plasmid pBBB-pinⅡ had been deleted by Xba I restriction enzyme,and the modified plasmid (pBBB-pinIIM) were transferred into Agrobacteriwn tumefaciens C58.A spider insecticidal protein (SlP)gene were isolated from plasmid DNA of pBPCVH3 and inserted into the plasmid DNA of PSHIC which caning gus and bar genes,Restriction enzyme digestion analysis showed recombinant pSHK-sIp were got Cotyledons with Petiole from aseptic seedlings were used as e...

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