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解脂耶氏酵母新型表达载体构建及癌基因rho在其中的表达  
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【英文篇名】 Construction of a new secretion/expression system of Yarrowia lipolytica and successfully expressing oncogene rho with it
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【作者】 赵鹤云; 汪小锋; 潘小幸; 刘云; 徐莉; 闫云君;
【英文作者】 ZHAO He-Yun WANG Xiao-Feng PAN Xiao-Xing LIU Yun XU Li YAN Yun-Jun(Key Laboratory of Molecular Biophysics of the Ministry of Education; College of Life Science and Technology; Huazhong University of Science and Technology; Wuhan; Hubei 430074; China);
【作者单位】 华中科技大学生命科学与技术学院分子生物物理教育部重点实验室;
【文献出处】 微生物学通报 , Microbiology China, 编辑部邮箱 2011年 12期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  中国期刊方阵  CJFD收录刊
【中文关键词】 解脂耶氏酵母; 抗生素污染; 基因mel; 基因rho;
【英文关键词】 Yarrowia lipolytica; Antibiotic contamination; mel; rho;
【摘要】 为了简化解脂耶氏酵母表达载体构建过程、消除抗生素污染,将mel基因(编码酪氨酸酶)作为新型报告基因用于构建新型酵母表达载体,利用组装PCR人工合成基因mel,并用重叠PCR将其与同源组成型强启动子pTEF、分泌性信号肽XPR2pre及强终止区LIP2t融合,构建新型胞外及胞内表达载体,并利用其在解脂耶氏酵母野生菌株中表达人源癌基因rho。成功获得mel全基因并将其与启动子、信号肽和终止区融合,得到融合片段TXML,用其替换原有表达载体的筛选标记基因ura3d4,构建得到新型胞外及胞内表达载体pINA1297-M和pINA1297-a-M,转化后的酵母阳性转化子性状明显,随后利用此新型表达系统获得可溶性异源蛋白Rho。首次实现了将mel作为一种便捷、价廉、无污染的新型筛选标记基因运用于非常规酵母表达系统中,更为mel在其它真核表达系统中的运用奠定了技术基础;获得的可溶性Rho蛋白可为研究其性质、结构、功能及与Rho癌基因家族其它成员的相互作用提供条件。
【英文摘要】 To simplify the construction procedure of Yarrowia lipolytica secretion/expression system,eliminate the antibiotic contamination,and use gene mel(encoding tyrosinase) as a new type reporter for constructing Y.lipolytica secretion/expression vectors.Gene mel was synthesized by assembly PCR,and fused with homologous promoter pTEF,signal sequence XPR2pre and terminator LIP2t by overlap PCR.The resulted fragment was used to construct new type of secretion/expression plasmids of Yar-rowia lipolytica expression s...
【基金】 国家863计划项目(No.2009AA03Z232,2010AA101501); 教育部新世纪优秀人才基金(No.NCET-07-0336); 湖北省自然科学基金项目(No.2009CDA046)
【更新日期】 2012-02-02
【分类号】 R730.2
【正文快照】 目前,微生物表达系统筛选重组转化子常用抗生素和营养缺陷型两种方法。尽管上述筛选方法已被广泛使用,但均存在一定的缺陷性,如:过多使用抗生素会产生“超级细菌”,最终危害人类健康;而多数野生菌本身不是营养缺陷型,故需要对原始菌株进行一系列基因操作,致使新系统的开发过程?

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