不同转化方法获得的转基因棉花外源基因拷贝数分析-中国学术期刊网络出版总库

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不同转化方法获得的转基因棉花外源基因拷贝数分析

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【英文篇名】	Comparative Analysis of Exogenous Gene Copy Numbers in Transgenic Cotton Transformed by Different Methods
【下载频次】	★★★★★
【作者】	杨晓杰; 刘传亮; 张朝军; 武芝霞; 张雪妍; 刘坤; 房卫平; 李付广;
【英文作者】	Yang Xiaojie1; 2 Liu Chuanliang1 Zhang Chaojun1 Wu Zhixia1 Zhang Xueyan1 Liu Kun1 Fang Weiping2 Li Fuguang1 1 Key Laboratory of Cotton Genetic Improvement; Ministry of Agriculture; Cotton Research Institute; Chinese Academy of Agriculture Sciences; Anyang 455000; China; 2 Economic Crop Research Institute; Henan Academy of Agriculture Sciences; Zhengzhou 450002;
【作者单位】	中国农业科学院棉花研究所农业部棉花遗传改良重点开放实验室; 河南省农业科学院院经济作物研究所;
【文献出处】	农业生物技术学报 , Journal of Agricultural Biotechnology, 编辑部邮箱 2011年 02期期刊荣誉：中文核心期刊要目总览 ASPT来源刊 CJFD收录刊
【中文关键词】	遗传转化方法; 转基因棉花; 实时定量PCR; 转基因拷贝数差异;
【英文关键词】	Genetic transformation methods; Transgenic cotton(Gossypium hirsutum L.); Real-time quantitative PCR; Difference of exogenous gene copy number;
【摘要】	转基因植物中外源基因拷贝数是影响其自身表达水平与遗传稳定性的重要因素。本研究旨在比较农杆菌介导法、基因枪轰击法和花粉管通道法等3种常用方法转化同一植物表达载体的转基因棉花(Gossypium hirsutum)中外源基因拷贝数的差异。本文主要采用实时定量PCR技术及相应的PfaffI分析法检测转基因棉花单株拷贝数,并与Southern杂交做了相互验证。实时定量PCR研究结果显示,农杆菌介导法、基因枪轰击和花粉管通道注射法获得的T0代转化体中,外源基因拷贝数为1～2的单株占群体总数的百分比分别为26.2%、60%和42.8%。外源基因拷贝数为3～5的单株比例分别为47.5%、40%和57.1%。另外,农杆菌介导获得的转基因群体中有高达27.3%的单株整合有5拷贝以上的外源基因,而基因枪轰击和花粉管通道注射法获得的转基因群体中没有发现5拷贝以上的转基因单株。研究结果表明,基因枪轰击和花粉管通道注射法均能获得较高比例低拷贝(1～3拷贝)的转化体。本研究结果对棉花转基因育种中转化方法的选择有一定的理论指导意义。
【英文摘要】	Identifying the copy number of foreign gene in transgenic primary plants is the basic step in genetic engineering application.In this paper,Real-time PCR and the related PfaffI method,usually applied to studying transgenic expression,was used to analyze comparatively the differences of exogenous gene copy number of transgenic cotton(Gossypium hirsutum) T0 plants transformed with one same vector by three different methods,Agrobacterium-mediated,gene-gun bombardment and pollen tube injection,respectively.Resu...
【基金】	国家重点基础研究发展规划(973)项目(2010CB126005)资助
【更新日期】	2011-05-26
【分类号】	S562
【正文快照】	转基因拷贝数是影响外源基因表达水平和遗传稳定性的重要因素。一般认为,直接转化法往往会造成外源基因整合位点较多、拷贝数多特征(Pawlowskiand Somers,1996;Vain et al.,2002);同样有研究表明,即使农杆菌介导的遗传转化,转化群体中仍普遍存在整合有3拷贝以上的转化体(Zapata

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