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【英文篇名】 |
Integrating specific sequence into target gene using PCR method |
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【下载频次】 |
★★ |
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【作者】 |
徐亚英;
王勇;
罗宏;
陈典; |
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【英文作者】 |
XU Yaying;
WANG Yong;
LUO Hong;
CHEN Dian(College of Horticulture;
Northeast Agricultural University;
Harbin 150030;
China); |
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【作者单位】 |
东北农业大学园艺学院; |
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【文献出处】 |
东北农业大学学报
, Journal of Northeast Agricultural University, 编辑部邮箱
2011年 04期
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览 ASPT来源刊 CJFD收录刊 |
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【中文关键词】 |
基因改造;
内含子;
cre基因;
PCR; |
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【英文关键词】 |
gene modification;
intron;
cre gene;
PCR; |
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【摘要】 |
应用PCR方法,利用3条引物与2个模板,分别采用一步PCR、两步PCR、三步PCR扩增策略,向cre基因内部引入一段内含子序列,以达到基因改造的目的。结果表明,利用一步PCR的策略,难以扩增得到目的基因,利用二步PCR的策略,虽然可以得到目的条带,但存在非特异扩增;通过三步PCR的策略,即第一步PCR扩增产物作为第二步扩增反应的引物,进行小循环的单引物扩增,第三步以第二步产物为模板进行双引物扩增的方法,可以高效扩增得到目的条带。说明三步PCR策略为基因改造的理想方法。 |
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【英文摘要】 |
An intron was introduced into a cre gene by one-step PCR,two-step PCR,three-step PCR amplification strategy,respectively,and using three primers and two templates,in order to achieve the purpose of genetic modification.In the study,it was found that by one-step PCR amplication strategy,target genes were amplified difficultly.By two-step PCR strategy,target genes could be found,but existed non-specific amplification.By three-step PCR strategy,a linear PCR was performed using the intron fragments from the abo... |
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【基金】 |
黑龙江省青年基金资助项目(QC07C46);
东北农业大学博士启动基金资助项目 |
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【更新日期】 |
2011-06-03 |
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【分类号】 |
Q78 |
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【正文快照】 |
基因定位突变是指将某一克隆基因按预先设计好的目标进行定点改造,它仅适用于基因序列已知,蛋白结构与功能的关系比较明确的基因[1]。由于它具有简单易行、重复性高等优点,现已发展成为基因操作的一种基本技术[2]。常见体外定点突变的方法有化学诱变、寡核苷酸介导的诱变、盒式 |
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