鸡新城疫病毒HN基因片段的原核表达及其单抗制备-中国学术期刊网络出版总库

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鸡新城疫病毒HN基因片段的原核表达及其单抗制备

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【英文篇名】	Prokaryotic Expression of Chicken NDV-HN Gene Fragment and Preparation of Its Monoclonal Antibody
【下载频次】	★★★★
【作者】	王贤; 陈芳芳; 余为一;
【英文作者】	WANG Xian et al(College of Animal Science and Technology; Anhui Agricultural University; Hefei; Anhui 230027);
【作者单位】	安徽农业大学动物科技学院;
【文献出处】	安徽农业科学 , Journal of Anhui Agricultural Sciences, 编辑部邮箱 2011年 20期期刊荣誉：ASPT来源刊 CJFD收录刊
【中文关键词】	新城疫病毒; HN; 原核表达; 单抗;
【英文关键词】	NDV; HN; Prokaryotic expression; Monoclonal antibody;
【摘要】	[目的]研究NDV-HN蛋白抗原表位在动物免疫应答中的作用特点。[方法]根据HN基因和载体pGEX-4T-1的多克隆位点自行设计1对引物,以该实验室保存的重组质粒为模板,进行PCR扩增,再将其所得片段定向插入pGEX-4T-1,构建重组质粒,并对该重组质粒进行鉴定;再将构建的重组质粒在大肠杆菌中表达;最后,鉴定了相应单克隆抗体。[结果]PCR结果表明,得到了与预期结果一致的长度为850 bp的片段;重组质粒鉴定结果表明,成功构建了包含目的基因片段的重组表达质粒pGEX-4T-HN23;重组质粒经原核表达获得大小为57 kD的融合蛋白,免疫Balb/c小鼠试验表明,用免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经ELISA筛选和3次亚克隆获得2株稳定传代(可传20代以上)和分泌抗NDV-HN抗体的杂交瘤细胞株。[结论]获得的鸡新城疫病毒HN单克隆抗体,为进一步研究HN在致病过程的作用及特异性诊断提供了重要试验材料。
【英文摘要】	[Objective] The aim was to study characteristics of the NDV-HN protein epitope in the animal immune response.[Method] A pair of specific primers was designed according to the HN gene sequence and multiple clone sites of vector PGEX-4T-1;and then PCR amplification was conducted by using a recombinant plasmid as template.The amplified fragment was inserted into pGEX-4T-1 to construct a new recombinant plasmid.After the recombinant plasmid was identified,it was expressed in prokaryotic cells.The monoclonal ant...
【基金】	国家自然基金项目(30671537)资助
【更新日期】	2011-09-05
【分类号】	S852.657
【正文快照】	新城疫(Newcastle disease,ND)是危害养禽业的重要传染病[1]。新城病毒(NDV)基因组全长15 186 bp,包含从-3′至-5′端的6个基因(NP-P-M-F-HN-L)[2]。其中血凝素-神经氨酸酶(Hemagglutinin-neuram inidase glycoprotein,HN)和融合蛋白(Fusion glycoprotein,F)在病毒的毒力和免疫

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