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应用腺病毒载体系统将HBV/C全基因组转导入HepG2细胞的方法学研究  
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【英文篇名】 Adenovirus-mediated transduction of HBV/C genome into HepG2 cell line
【下载频次】 ★★★
【作者】 周彬; 梁敏锋; 李伟东; 王程; 王战会; 侯金林;
【英文作者】 ZHOU Bin1; LIANG Min-feng1; LI Wei-dong2; WANG Cheng1; WANG Zhan-hui1; HOU Jin-lin1 1Department of Infectious Diseases; Nanfang Hospital; Southern Medical University; Guangzhou 510515; China; 2Department of Laboratry Medicine; Railway Hospital of Shaoguan; Shaoguan 512023;
【作者单位】 南方医科大学南方医院感染内科; 韶关市铁路医院检验科;
【文献出处】 南方医科大学学报 , Journal of Southern Medical University, 编辑部邮箱 2008年 10期  
期刊荣誉:中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 肝炎病毒; 乙型; 腺病毒; AdEasy系统;
【英文关键词】 hepatitis B virus; adenovirus; AdEasy system;
【摘要】 目的运用腺病毒系统将HBV/C全基因组高效地导入肝癌细胞系,为研究HBV的复制及蛋白表达情况构建技术平台。方法构建HBV/C基因型毒株的1.3拷贝全基因序列,运用腺病毒系统(AdEasy),首先将1.3拷贝HBV全基因序列插入到穿梭载体pAdTrack,经测序证实插入序列的正确性后用PmeI酶切线性化重组穿梭质粒,转化Adeasier-1感受态细胞,在细菌细胞内发生同源重组,所得重组腺病毒质粒pAdEasy-HBV/C用PacI酶切线性化,用脂质体法转染293细胞来包装重组病毒。用适量感染复数的重组腺病毒感染HepG2细胞,并对感染细胞上清中的HBVDNA、HBeAg和HBsAg分别进行了定量检测。结果成功运用腺病毒系统将1.3拷贝HBV全基因组高效率地导入HepG2细胞,导入的HBV能够运用自身的复制调控元件进行病毒的复制和蛋白表达。结论运用AdEasy系统能够简便、快速、高效地将HBV全基因组导入肝癌细胞系,为抗病毒药物的筛选及评价提供了有效的技术平台。
【英文摘要】 Objective To establish a method for efficient transfer of 1.3-fold HBV/C genome into HepG2 cell line using adenoviral vector system for studying the replication and antigen expression of HBV.Methods The 1.3-copy overlength genome of HBV genotype C was constructed and cloned into the shuttle vector pAdTrack.After confirmation of the constructed HBV genome by sequencing, the resultant plasmid linearized by digestion with Pme I was transformed into competent E.coli Adeasier-1 cells.The recombinants of pAdEasy-...
【基金】 国家自然科学基金(30500434)
【更新日期】 2008-12-15
【分类号】 R346
【正文快照】 HBV具有严格的宿主和组织特异性,由于HBV复制过程有赖于肝细胞特异性细胞因子的参与,而且其受体具有非常严格的宿主特异性,目前所知HBV仅对人和黑猩猩及其原代培养的肝细胞易感,因此极大地限制了对HBV病毒学特点及其致病机制进行更为深入的研究。体外培养的HepG2和Huh7细胞系虽

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