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K202A突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的影响  
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【英文篇名】 Effect of K202A Mutation in the Thermostability of Penicillum expansum Lipase
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【作者】 邹有土; 吴义真; 施文芳; 林琳;
【英文作者】 ZOU You-tu WU Yi-zhen SHI Wen-fang LIN Lin(Life Sciences College of Fujian Normal University; Fuzhou 350108; China);
【作者单位】 福建师范大学生命科学学院; 福建师范大学生命科学学院 福州;
【文献出处】 中国生物工程杂志 , China Biotechnology, 编辑部邮箱 2007年 12期  
期刊荣誉:中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 扩展青霉脂肪酶; 定点突变热稳定性;
【英文关键词】 Penicillum expansum Lipase Site-directed mutagenesis Thermostability;
【摘要】 利用易错PCR定向进化扩展青霉脂肪酶(PEL),获得了一株热稳定性有所提高的随机突变体(ep8),ep8包含有一个氨基酸的改变。为进一步提高其热稳定性,利用重叠延伸PCR法,以ep8基因为模板,将第202位赖氨酸突变为丙氨酸(K202A),构建表达质粒pAO815-ep8-K202A。并将其引入毕赤酵母GS115构建叠加突变体(PEL-ep8-K202A)。同时以野生型lip07为模板构建单点突变体:PEL-lip07-K202A。15%SDS-PAGE结果分析表明突变体分子量与野生型一致,约为28kDa。表达产物热稳定性分析结果表明:野生型(PEL)的Tm值为39.03℃,而以野生型为模板进行定点突变得到的单点突变酶(PEL-lip07-K202A),其Tm却降低了2℃,为37.08℃。叠加突变酶(PEL-ep8-K202A)的Tm为41.66℃,比野生型酶提高2.63℃,比随机突变体ep8生产的酶(PEL-ep8)的Tm提高了1.21℃。
【英文摘要】 Lipase gene from Penicillium expansum(lip07) was cloned and over-expressed in Pichia pastoris.a random mutant named ep8,which contained a single amino acid substitution,was obtained by using the lip07 as an error-prone PCR template in previous study.ep8 shows higher thermostability than that of lip07,To further improve the thermostability of the lipase,the Lys of wild-type(lip07) and mutant(ep8) in 202 were substituted by Ala using the Overlap extension PCR technique respectively.The mutant genes(lip07-K202...
【基金】 国家自然科学基金资助项目(30270033); 福建省自然科学基金资助项目(B0120001,C0410009)
【更新日期】 2008-01-18
【分类号】 Q789
【正文快照】 扩展青霉PF898是由出发菌株经过多代诱变而得到的一株具有工业价值的脂肪酶高产菌株,可在碱性条件下分解三酰甘油产生脂肪酸及甘油[1,2]。近年来本课题组完成了扩展青霉脂肪酶(PEL)cDNA(GenBank accession No.AF284064)和基因组DNA(GenBank accession No.AF330635)的克隆,该脂?

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