质粒制备和反应温度对嵌套缺失技术的影响-中国学术期刊网络出版总库

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质粒制备和反应温度对嵌套缺失技术的影响

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【英文篇名】	Influence of Plasmid Preparation and Temperature on Nested Deletions
【下载频次】	★★★
【作者】	王子良; 许丽艳; 李恩民;
【英文作者】	WANG Zi-liang 1; XU Li-yan 2; LI En-min 1; (1.Department of Biochemistry and Molecule Biology; College of Medicine Science; Shantou University; Shantou Guangdong515041; China; 2.Department of Pathology; China);
【作者单位】	汕头大学医学院生化与分子生物学教研室; 汕头大学医学院肿瘤病理研究室; 汕头大学医学院生化与分子生物学教研室广东汕头; 广东汕头;
【文献出处】	癌变.畸变.突变 , Carcinogenesis,Teratogenesis and Mutagenesis, 编辑部邮箱 2005年 02期期刊荣誉：ASPT来源刊 CJFD收录刊
【中文关键词】	嵌套缺失技术; 影响因素; NGAL基因;
【英文关键词】	nested deletion; influencing factors; NGAL gene;
【摘要】	背景与目的 :探讨影响嵌套缺失反应的重要因素 ,找出相应的解决方案。材料与方法 :以构建好的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophilgelatinaseassociatedlipocalin,NGAL)基因5’端调控区质粒pGLB_G6为研究对象,采用碱裂解法、聚二乙醇纯化法及QIAGEN试剂盒等3种不同方法制备该质粒 ,分别研究ExoⅢ对它们进行非特异性切割的敏感性 ,选出对ExoⅢ不敏感的质粒制备方法 ;在22℃和37℃分别进行缺失反应 ,琼脂糖凝胶电泳监控 ,以确定缺失反应是否已经发生 ;应用PCR技术与限制性内切酶酶切相结合的方法鉴定缺失子。结果 :QIAGEN试剂盒制备的质粒对ExoⅢ的非特异性切割最不敏感 ,可用于进行下一步的缺失反应 ;在22℃进行缺失反应时 ,电泳鉴定发现DNA片段的长度没有明显的变短 ,而在37℃时 ,同一反应体系的DNA片段长度明显缩短 ;进一步用限制性内切酶酶切可筛除PCR中的假阳性 ,获得准确的缺失子。结论 :质粒的质量是确保进行特异性缺失反应的关键因素 ,通过QIAGEN试剂盒制备的质粒质量较好 ;设立一个37℃缺失对照管可作为判断低温条件下是否发生...
【英文摘要】	BACKGROUND&AIM: To explore the influencing factors of nested deletions and find some methods to resolve interrelated problems. MATERIAL AND METHODS: Alkaline lysis,purification by polyethylene glycol(PEG)and QIAprep Spin Miniprep Kit were used to prepare the plasmid pGLB-G6carrying the5'flanking region of NGAL gene to study the nonspecific degradation of Exonuclease(ExoⅢ),the best method of preparing the plasmid,not susceptible to ExoⅢ,would be screened.ExoⅢdeletion reaction was generated at22℃and37℃respect...
【基金】	国家自然科学基金面上项目(No.39900069 ,No.30170428 , No.30370641); 广东省自然科学基金重点项目(No.37788) ; 广东省自然科学基金面上项目(990799,010431)
【更新日期】	2005-08-19
【分类号】	Q784
【正文快照】	嵌套缺失[1](NestedDeletions)原理就是利用核酸外切酶Ⅲ(ExonucleaseⅢ ,ExoⅢ)[2,3]可特异性地切割线型双链DNA分子3’凹端这一性质而进行的一种缺失反应。利用该技术可构建一系列梯度缺失重组子 ,借此可对该段DNA分子上的重要功能区进行定位 ,用于寻找在基因表达调控中起关?

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