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人脑胶质瘤组织全长cDNA文库的快速构建与鉴定  
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【英文篇名】 Rapid construction and identification of full-length cDNA library of human glioma tissues
【下载频次】 ★★
【作者】 涂艳阳; 徐如祥; 杨志林; 姜晓丹; 吴曙光; 陈一招; 蔡颖谦; 杜谋选; 高杨;
【英文作者】 TU Yan-yang 1; XU Ru-xiang 1; YANG Zhi-lin 1; JIANG Xiao-dan 1; WU Shu-guang 2; CHEN Yi-zhao 1; CAI Ying-qian 1; DU Mou-xuan 1; Gao Yang 21 Institute of Neuroscience; Zhujiang Hospital; First Military Medical University; Guangzhou 510282; China; 2 Institute of Pharmaceutics; Guangzhou 510515;
【作者单位】 第一军医大学珠江医院神经医学研究所; 第一军医大学药物研究所; 第一军医大学药物研究所 广东广州; 广东广州;
【文献出处】 第一军医大学学报 , Journal of First Military Medical University, 编辑部邮箱 2003年 09期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 胶质瘤; cDNA; 基因文库; 抑癌基因;
【英文关键词】 glioma; cDNA; gene library; tumor suppressor genes;
【摘要】 目的采用SMART(switching mechanism at 5' end of RNA transcript)技术,快速构建高质量的人脑胶质瘤组织全长cDNA文库。方法提取多份人脑胶质瘤组织标本的总RNA,混合后处理得到纯化的mRNA,利用CDSⅢ/3'PCR引物(含SfiⅠB酶切位点)反转录,用SMARTⅣOligo(dT)(含SfiⅠA酶切位点)作为mRNA5'端延伸出去的模板,合成多出一段SMARTⅣOligo(dT)互补序列的cDNA第一链,进而以此序列为引物合成全长的双链cDNA。双链cDNA经SfiⅠ(A&B)酶切后克隆入经SfiⅠ酶切的λTriplEx2载体,再经噬菌体包装蛋白包装成为cDNA文库。结果获得2.4×106个重组子,重组率达100%,文库扩增后,滴度达4.5×109 pfu/ml,插入cDNA平均长度为1.2kb。结论成功构建高质量的人脑胶质瘤组织全长cDNA文库,为进一步筛选、克隆人脑胶质瘤抑癌基因及特异性表达基因奠定基础。
【英文摘要】 Objective To explore a method for rapid construction of a full-length cDNA library of human glioma tissues using switching mechanism at 5' end of RNA transcript (SMART). Methods The total RNA was extracted from several samples of human glioma tissues and the mRNA was subsequently separated. Multiple mRNA samples were mixed to be used as the template for the first-strand cDNA synthesis. The CDSⅢ/3' PCR primer (containning SfiⅠB site) was used in the first-strand reaction, and the SMART ⅣOligo(dT) (conta...
【基金】 国家自然基金资助项目(30170961)~~
【分类号】 R739.4
【正文快照】 构建人脑胶质瘤组织全长cDNA文库,可以极大地方便胶质瘤相关基因筛选工作,是进一步进行胶质瘤基因研究的重要基础[1]。而传统的cDNA文库构建方法繁琐且工作量大,并经常出现特异性差和滴度低的问题,而且不易得到包括5'和3'非翻译区的全长基因。本课题利用Clontech公司最新的SMAR

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