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日本对虾精巢和卵巢全长cDNA文库的构建  
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【英文篇名】 The Construction of Full-length Testis and Ovary cDNA Libraries of Marsupenaeus japonicus
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【作者】 王艺磊; 张子平;
【英文作者】 WANG Yi|Lei① ZHANG Zi|Ping②(①Aquaculture Biotechnology; Fisheries College; Jimei University; Xiamen 361021; ②Department of Biology and Chemistry; City University; Kowloon Hongkong; China);
【作者单位】 集美大学水产生物技术研究所; 香港城市大学生物与化学系香港九龙 水产学院;
【文献出处】 动物学杂志 , Chinese Journal of Zoology, 编辑部邮箱 2003年 02期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  中国期刊方阵  CJFD收录刊
【中文关键词】 cDNA文库; 精巢; 卵巢; 日本对虾;
【英文关键词】 cDNA library; Testis; Ovary; Marsupenaeus japonicus;
【摘要】 采用RDP试剂提取日本对虾精巢和卵巢的总RNA ,经Oligotex试剂盒纯化得到mRNA。根据SMART(switchingmechanismat5′endofRNAtranscript)技术 ,利用含SfiⅠB酶切位点的oligo(dT)引物合成cDNA第一条链 ,利用含SfiⅠA酶切位点的SMART核苷酸作为cDNA第一条链在mRNA 5′端延伸出去的模板 ,采用LDPCR引物合成双链cDNA ,双链cDNA用SfiⅠ酶切和过柱分级分离后 ,与λTriplEx2两臂进行连接 ,随后进行λ噬菌体体外包装反应 ,构建成精巢和卵巢之全长cDNA文库。构建好的文库中 ,精巢的文库含有约 1 0 4× 1 0 6的重组子 ,卵巢的文库含有约为 1 2× 1 0 6的重组子。文库扩增后 ,滴度分别达7 3× 1 0 8(Pfu ml)和 9 1× 1 0 8(Pfu ml) ,插入cDNA长度为 4 0 0bp～ 3kb ,说明两文库均具有良好的质量 ,为进一步筛选、克隆精巢与卵巢特异表达基因奠定了基础。
【英文摘要】 To clone the testis and ovary specific expression genes of Marsupenaeus japonicus, we constructed two full-length cDNA libraries using the SMART cDNA library construction kit (Clontech). Total RNAs were isolated from tests and ovaries using RDP, a reagent made by us and modified from that used by Chomczynski and Sacchi (1987) for the simultaneous isolation of RNA, DNA, and protein. Oligotex (QIAGEN) was used to separate the mRNA of testes and ovaries from total RNA. The “anchor first-strand cDNA containing ...
【基金】 国家自然科学基金 (No.30 0 70 5 97); 福建省自然科学基金 (No.B9910 0 2 8); 国家教育部骨干教师基金资助项目
【分类号】 Q78
【正文快照】 尽管对虾精巢和卵巢的结构与功能 ,精子和卵子的结构、发生等在细胞水平已有许多研究 ,但是 ,对虾的性别决定、性别分化相关基因迄今未见报道。然而 ,如同已在哺乳动物和其它动物中初步揭示的 ,这些基因推测是在雌雄性腺中特异表达 ,与性腺发育密切相关的 ,如ＳＲＹ基因[1] 。?

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