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高效表达具有生物学活性的植酸酶的毕赤酵母
 
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【作者】
姚斌
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张春义
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王建华
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范云六
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【作者单位】
中国农业科学院饲料研究所
;
中国农业科学院生物技术中心
;
【文献出处】
中国科学C辑:生命科学
,
,
编辑部邮箱
1998年 03期
期刊荣誉:中文核心期刊要目总览 ASPT来源刊 CJFD收录刊
【中文关键词】
植酸酶基因phyA2
;
重组毕赤酵母
;
高效表达
;
【摘要】
对来源于Aspergillusniger 96 3的植酸酶基因 phyA2进行了改造 ,包括去掉基因中的内含子和信号肽编码序列 ,在不改变所编码氨基酸的情况下 ,定点突变优化了对此基因在酵母中高效表达起关键作用的Arg密码子 .经改造的植酸酶基因按正确的阅读框架融合到毕赤酵母 (Pichiapastoris)高效表达载体 pPIC9上的α 因子信号肽编码序列 3′端 ,重组表达载体电击转化毕赤酵母得到重组转化子 ,经Southernblotting分析证实了植酸酶基因已整合到酵母基因组中 ,并确定了基因整合的拷贝数 .Northernblotting分析证明植酸酶基因能进行正常的转录 .SDS PAGE分析和表达产物的酶活性研究证明 ,植酸酶能有效分泌和高效表达 (Arg密码子优化后其表达量可达每毫升培养液 1 5 0 0 0U ,比Arg密码子没有优化的表达量高约 37倍 ,比原菌株A .niger 96 3的表达量高约 30 0 0倍 ) ,表达产物具有正常的生物学活性 .这是迄今为止我国饲料工业中 ,构建的第 1株具有实用价值和应用前景的生产饲料添加剂的基因工程菌株
【基金】
国家“八六三”高技术计划资助项目
【分类号】
Q78
【正文快照】
磷是动物生长、繁殖、骨骼矿化及代谢所必需的矿物元素之一.作为动物饲料主要成分的植物性饲料中虽含有相当数量的总磷,但其中50%~70%是以植酸磷(六磷酸肌醇)的形式存在,单胃动物缺乏分解植酸磷所必需的酶,故磷的利用率仅有0%~40%,从而造成磷源浪费、饲料成本增加和动物生产?
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