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大肠杆菌pheA与tyrB基因的克隆与串联表达  
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【英文篇名】 Cloning of pheA and tyrB genes from Escherichia coli and expression as operons
【下载频次】 ★★★★
【作者】 彭永济; 黄伟达; 沈水源; 江培; 范长胜;
【英文作者】 Peng Yongji; Huang Weida; Shen Shuiyuan; Jiang Peihong; Fan Changsheng(Department of Biochemistry; Department of Microbology and Microbial Engineering);
【作者单位】 上海微生物和微生物工程系;
【文献出处】 复旦学报(自然科学版) , , 编辑部邮箱 1996年 06期  
期刊荣誉:中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  中国期刊方阵  CJFD收录刊
【中文关键词】 苯丙氨酸; PCR; pheA基因; tyrB基因; 克隆; 表达;
【英文关键词】 phenylalanine; PCR; pheA; tyrB; cloning; expression;
【摘要】 为探讨用基因工程的手段改良苯丙氨酸的发酵菌株,采用聚合酶链反应(PCR)的方法,从大肠杆菌总DNA中克隆得到了编码苯丙氨酸合成途中的两个关键酶基因--即分枝酸变位酶(CM)/预苯酸脱水酶(PD)基因pheA与苯丙氨酸转氨酶(PAT)基因tyrB,在大肠杆菌中进行了这两个基因的单个和串联表达。pheA和tyrB基因分别都能在λ噬菌体的P。启动子之后得到较大量的表达,在SDS-PAGE上出现清晰的条带,使表达菌体的蛋白抽提物中CM/PD和PAT的比活分别提高了14.1倍/7.9倍和3.5倍.当pheA和tyrB以tyrB-pheA的形式进行串联表达时,酶的比活分别提高了4.2倍/2.4倍和2.5倍;而以pheA-tyrB的形式串联表达时,三种酶的比活分别提高了17.5倍/8.7倍和3.3倍.结果表明,后一种串联方式的表达效果较好.
【英文摘要】 Chorismate mutase (CM ), prephenate dehydratase (PD ), and phenylalanine aminotransferase (PAT) are the three key enzymes in the fermentation of phenylalanine. In E. colt,the first two are encoded by a single gene pheA,while the third by tyrB gene. PheA and tyrB genes were cloned from an E. colt mutant strain resistant to mfluro-L-phenylalanine by polymerase chain reaction (PCR). These genes were expressed either separately or linked as an operon under lamda phage promotor PR in E. colt. Distinct bands w...
【基金】 国家八五攻关项目
【分类号】 TQ922.9
【正文快照】 大肠杆菌pheA与tyrB基因的克隆与串联表达彭永济,黄伟达,沈水源,江培 ,范长胜(生物化学系,微生物和微生物工程系)提要为探讨用基因工程的手段改良苯丙氨酸的发酵菌株,采用聚合酶链反应(PCR)的方法,从大肠杆菌总DNA中克隆得到了编码苯丙氨酸合成途中?

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